La falla del CFTR en Fibrosis Quística reduce la actividad del complejo I mitocondrial

VALDIVIESO AG; TAMINELLI GL; SANTA COLOMA TA

Mar del Plata

Congreso; LII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2007

SAIC

La Fibrosis Quística (FQ) es una enfermedad genética producida por la falla del canal de cloruro CFTR. Previamente (Valdivieso et al. BBRC 356:805, 2007), hemos confirmado que en FQ existe una regulación negativa del ARNm de MTND4, un componente fundamental para la correcta actividad del Complejo I mitocondrial (CIm). El objetivo de éste trabajo era determinar si la regulación negativa del ARNm de MTND4, observada previamente en células y tejidos FQ, podría inducir una disminución en la actividad del CIm. La actividad del CIm se midió mediante Blue Native-PAGE a partir de mitocondrias aisladas de líneas celulares derivadas de pacientes con FQ (CFDE y IB3), de las mismas células que expresan ectópicamente wt CFTR (CFDE/6RepCFTR y S9), y de células T84 de cáncer de colon (wt CFTR). Se trataron estas células con glibenclamida y CFTR(inh-172), ambos inhibidores del CFTR, para modular la expresión de ND4. También diseñamos un ARN de interferencia (siARN) de CFTR, con el fin de reducir la expresión del CFTR en células T84 y confirmar los resultados obtenidos con inhibidores. Resultados: Se observó una disminución significativa de la actividad del CIm (NADH-ubiquinona oxidorreductasa) en células CFDE y CFDE/6RepCFTR  tratadas con glibenclamida, en comparación con la actividad de las células CFDE/6RepCFTR. Estas observaciones fueron confirmadas en células IB-3 y S9, como así también en células T84 tratadas con siRNA de CFTR y con los inhibidores arriba mencionados. La reducción en la actividad del CIm observada, probablemente se debe a la disminución de la proteína ND4 mitocondrial ocurrida por la regulación negativa del ARNm de MTND4. La falla en la actividad del CmI en FQ podría explicar el aumento de apoptosis y de especies reactivas de oxigeno (ROS) en FQ, observado por otros autores y tener quizá un rol importante en la definición del fenotipo FQ. Agradecimientos: Universidad de Buenos Aires (sub. X-156) y ANPCYT (sub. PICT 13970).