Regulación de la tirosina quinasa c-src mediante la actividad del canal de cloruro CFTR

MASSIP COPIZ MARÍA MACARENA; VALDIVIESO ANGEL GABRIEL; CLAUZURE, MARIÁNGELES; SCHULMAN GUSTAVO; SANTA COLOMA TOMÁS A.

Mar del Plata

Congreso; LVII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2012

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La Fibrosis Quística (FQ) es una de las enfermedades hereditarias autosómicas recesivas más frecuentes en la mayoría de los países europeos y americanos, entre ellos la Argentina, con una incidencia de 1 cada 2500. La FQ es causada por mutaciones en el canal de cloruro CFTR, siendo la más frecuente la deleción de la fenilalanina en la posición 508. Anteriormente encontramos que la expresión y activación de c-Src estaba aumentada en células FQ. Los objetivos de este trabajo fueron determinar el rol diferencial del LPS sobre la actividad de c-Src en células control y células FQ y corroborar si en otros modelos celulares se puede observar este aumento de la actividad de c-Src. Primeramente, se utilizaron células IB3-1 (con la mutación deltaF508 que afecta el transporte de Cl-) y S9 (IB3-1 corregidas mediante un vector viral que expresa CFTR wt) a las cuales se las trató con cóctel de estimulación de la actividad del CFTR (db-AMPc, isoproterenol e IBMix) y concentraciones crecientes de LPS. Mediante la técnica de Western Blot se observó un aumento diferencial de la actividad de c-Src en las células IB3-1 comparadas con las S9. Posteriormente, se utilizó otro modelo celular para poder corroborar estos resultados. Se transfectaron células CaCo2, que expresan CFTR wt, con cuatro ARNs de interferencia. Se realizó una selección clonal de estas células y se observó que los ARNi inhibieron la expresión del CFTR en diferente grado. Mediante WB se observó que la actividad de c-Src era mayor en las líneas celulares transfectadas que mostraban mayor inhibición del CFTR. Paralelamente, se están estudiando los posibles mecanismos involucrados en la señalización CFTR→Src. En conclusión, la inhibición de la actividad o expresión del CFTR produce un incremento en la actividad de c-Src. Agradecimientos: Subsidios de la ANPCYT (PICT-2007, 00628), CONICET (PIP 2009-2011) y UCA. Becas CONICET (MMMC, MC, GS) y UCA (AGV).