Regulación de la Tirosina Quinasa C-SRC mediante la actividad del canal de Cloruro CFTR

MASSIP COPIZ MARÍA MACARENA; VALDIVIESO ANGEL GABRIEL; TAMINELLI GUILLERMO LUIS; CLAUZURE, MARIÁNGELES; SANCHEZ FRANCISCO; SCHULMAN GUSTAVO; TEIBER MARÍA LUZ; SANTA COLOMA TOMAS A.

Mar del Plata

Congreso; LVI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2011

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La Fibrosis Quística (FQ) es una enfermedad autosómica recesiva causada por mutaciones en el canal de cloruro CFTR. Previamente encontramos que la expresión y activación de cSrc estaba aumentada en células FQ (J Biol Chem 277:17239, 2002). Además, en las heridas está aumentada la activación de c-Src y las células FQ tienen una cicatrización más lenta (Trinh, 2008, Schiller, 2010). Los objetivos de este trabajo fueron determinar si se puede corroborar un aumento de la actividad de c-Src mediante microscopía confocal en células FQ y si c-Src se encuentra aumentado en forma diferencial en las heridas de una monocapa celular. Utilizando células CaCo-2, que expresan CFTR wt, transfectadas con RNA de interferencia para CFTR, observamos que había un aumento de la actividad de c-Src. Sin embargo, las células no estaban clonadas y se perdió la inhibición con los pasajes. Ahora estamos clonando las células para solucionar este problema. También se utilizaron células IB3-1 (mutación deltaF508 que afecta el transporte de Cl-), S9 (IB3-1 corregidas mediante un vector viral que expresa CFTR wt) y C38 (iguales que las S9 pero el CFTR wt tiene parte del extremo 5´ truncado). Mediante microscopía confocal, se observó mayor actividad de c-Src (medida con un anticuerpo que reconoce c-Src fosforilado en la Tyr418) en las células IB3-1 comparadas con las S9. Luego, se crecieron las células en monocapa llegando a confluencia y se realizaron varias heridas. En este momento se están probando distintas condiciones para determinar si hay un aumento diferencial de la expresión de c-Src en heridas hechas a monocapas de estas células. Asimismo, se están estudiando los posibles mecanismos involucrados en la señalización CFTR-Src. En conclusión, la inhibición de la actividad o expresión del CFTR produce un incremento en la actividad de c-Src. Agradecimientos: Subsidios del CONICET (PIP 2009-2011), ANPCYT (PICT-2007, 00628) y UCA. Becas CONICET (AGV y MMMC), ANPCYT (MC) y UCA (FS, GLT, MLT).