Desarrollo de un sistema de regeneración y transformación para el estudio de la apomixis en Paspalum notatum.

WOITOVICH N; PERMINGEAT H; MANCINI M; ORTIZ JPA; QUARIN CL; PESSINO SC; FELITTI S

San Miguel d Tucumán

Congreso; XXXVIII Congreso Argentino de Genética. Sociedad Argentina de Genética; 2009

Sociedad Argentina de Genética

La apomixis es un modo de reproducción asexual vía semillas presente en angiospermas. En trabajos previos hemos identificado varias decenas de genes implicados en el desarrollo apomíctico de P. notatum. El objetivo de este trabajo fue desarrollar un sistema de cultivo de tejidos, regeneración y transformación de plantas para poder realizar estudios funcionales de estos genes candidatos en la especie. Se utilizaron genotipos poliploides apomícticos y sexuales. Se cultivaron semillas y embriones maduros en medio IM con diferentes hormonas según el explanto utilizado. Entre 4 y 6 semanas más tarde los callos embriogénicos fueron sub-cultivados en el mismo medio utilizado para la inducción. Luego de 2 a 4 semanas fueron transferidos a medio IM + BAP, GA3 y CuSO4 para la regeneración de vástagos. Los callos con vástagos de más de 5 mm fueron transferidos a medio SH + NAA y vitamina B5 para el desarrollo de raíces. Los callos embriogénicos fueron transformados utilizando la técnica biolística. Se emplearon micropartículas de tungsteno recubiertas con el plásmido pDP687 (que contiene genes reguladores de la síntesis de antocianinas) y se aplicaron presiones en un rango de 800-1100 psi. A las 48 hs se examinó el tejido bombardeado para detectar la presencia de células transformadas con coloración rojiza. Se obtuvieron curvas de selección con glufosinato y kanamicina. La tecnología desarrollada se utilizará para intentar la transformación estable de los mismos genotipos con vectores de silenciamiento, para analizar si los genes candidatos afectan el desarrollo reproductivo en esta especie.