Desarrollo de una plataforma biolística de transformación estable para el estudio de la apomixis en Paspalum notatum

MANCINI M; WOITOVICH N; PERMINGEAT H; ORTIZ JPA; QUARIN C; PESSINO S; FELITTI S

Corrientes

Congreso; XL Congreso Argentino de Genética; 2011

Sociedad Argentina de Genética

Nuestro grupo identificó varios genes posiblemente asociados con la apomixis en Paspalum notatum. El objetivo de este trabajo fue desarrollar una plataforma de transformación para realizar estudios funcionales modificando la expresión de estos genes en órganos reproductivos de plantas apomícticas y sexuales. En los experimentos de cultivo in vitro se ensayaron tres tipos de explantos: semillas maduras, embriones maduros y meristemas de vástagos. Los porcentajes de regeneración obtenidos fueron  47%, 20% y 46%, respectivamente. Los experimentos de transformación transiente fueron realizados sobre callos de semillas maduras, utilizando un acelerador de partículas de tungsteno y presiones de helio de 600, 800, y 1100 psi. Los vectores de transformación incluyeron como genes reporteros a dos involucrados en la síntesis de antocianinas o a GFP, ambos clonados bajo el promotor act1 de arroz. El número de células transformadas/100 callos fue de 86 y 105 para antocianinas y GFP, respectivamente. A partir de curvas de selección para glufosinato de amonioy kanamicina, se eligieron concentraciones de 1 mg/L (% de regeneración 12,2)y 50 mg/L % de regeneración 21,5%), respectivamente. Los experimentos de transformación estable se realizaron utilizando presiones de 800 psi y construcciones en horquilla del gen N46 (MAP3K), junto al selector bar (tolerancia a glufosinato de amonio), ambos bajo el promotor act1 y co-transformando con GFP bajo el promotor act1. El procentaje de regeneración fue de 16 plantas/100 callos bombardeados. Actualmente está en evaluación mediante experimentos de PCR y de hibridación Southern la introducción estable del transgen.