Empleo de un modelo transgénico murino (oct4-gfp) para el estudio del efecto de perturbadores estrogénicos sobre la diferenciación de células germinales masculinas.

SANTAMARÍA C.; PAGOTTO R.; PORRO V.; HARREGUY M.; RAMÍREZ S.; GOYENECHE L.;; FERNÁNDEZ G.; CRISPO M.; ABUD J.; BOLZAN B.; LUQUE E.; BOLLATI-FOGOLN M.; RODRÍGUEZ H.

Congreso; LVIII REUNIÓN CIENTÍFICA ANUAL; 2013

El testículo es uno de los órganos más afectados por la exposición a perturbadores estrogénicos (PEs) durante su desarrollo, especialmente aquellos con actividad estrogénica (xenoestrógenos). El objetivo de este trabajo consistió en caracterizar un modelo animal para el estudio de los efectos de estos PEs sobre el desarrollo de células germinales masculinas. En primer lugar, se rederivó una colonia del ratón transgénico Oct4-GFP, que expresa la GFP (Green Fluorescence Protein) bajo el promotor Oct4 sólo en la población de células germinales indiferenciadas, permitiendo identificar y aislar esta población de manera específica. Se determinó el patrón de expresión de Oct4-GFP en la etapa prepuberal y adulta: los testículos de crías Oct4-GFP de 3, 5, 7, 10, 14 y 80 días postnatal (dpn) fueron aislados y disgregados enzimáticamente, y las suspensiones celulares analizadas por citometría de flujo (CF) para determinar el porcentaje de células GFP+ (% de células germinales inmaduras) y la intensidad media de fluorescencia (MFI) por GFP (nivel de expresión de Oct4). También se analizó el contenido de ADN de las fracciones celulares Oct4-GFP+ empleando la tinción con yoduro de propidio (PI). El día 3dpn mostró el mayor porcentaje de células en fase S, sugiriendo que este tipo celular se encuentra replicándose activamente en este momento. El mayor%GFP+ se estableció en el día 7dpn, siendo la edad seleccionada para la siguiente etapa. Para evaluar la acción estrogénica sobre los parámetros antes mencionados, se expuso a hembras preñadas al estrógeno sintético 17-α-etinilestradiol (EE2) o vehículo (control), desde el día 5 post coito al dpn7 por vía oral. La exposición perinatal a EE2 (5ug/kg.día) incrementó la MFI de la población testicular GFP+ a 7 dpn. Dado que la represión de Oct4 es necesaria para la diferenciación de espermatogonias, nuestros resultados avalan el uso de este modelo animal para el estudio de xenoestrógenos sobre la diferenciación de esta población.