Isoperoxidasas de cultivos de raíces transformadas involucradas en la remoción de fenol y 2,4-diclorofenol

GONZALEZ P, BUSTO V, AGOSTINI E, MILRAD S

Villa Giardino, Córdoba

Congreso; XV Jornadas Científicas de la Soc. de biología de Cordoba; 2005

Sociedad de Biología de Córdoba

ISOPEROXIDASAS DE CULTIVOS DE RAÍCES TRANSFORMADAS INVOLUCRADAS EN LA REMOCIÓN DE FENOL Y 2,4-DICLOROFENOL González P., Busto V., Agostini E., Milrad S. Dpto Biología Molecular. FCEFQyN. UNRC. Córdoba. pgonzalez@exa.unrc.edu.ar ., Busto V., Agostini E., Milrad S. Dpto Biología Molecular. FCEFQyN. UNRC. Córdoba. pgonzalez@exa.unrc.edu.ar Las peroxidasas (Px) han sido objeto de numerosos estudios debido a sus importantes roles fisiológicos y a sus numerosas aplicaciones industriales. Se han utilizado en remoción de fenol y 2,4-diclorofenol (2,4-DCF), compuestos de gran toxicidad presentes en efluentes de varias industrias. En estudios previos hemos utilizado cultivos de raíces transformadas de nabo (RTN) y tomate (RTT) como fuente de Px para la remoción de estos compuestos. El objetivo de este trabajo fue estudiar y caracterizar bioquímicamente ese proceso mediante el uso de Px purificadas a partir de cultivos de RTN y RTT. Se purificaron isoenzimas de Px por cromatografía de intercambio iónico a partir de extractos totales de RT. Las fracciones eluídas fueron analizadas por isoelectroenfoque que reveló la presencia de diferentes isoperoxidasas: básicas, neutras y ácidas. Con estas isoenzimas se efectuaron ensayos de remoción, incubando una hora con H2O2 1mM y 10 mg/l de los contaminantes. La eficiencia de remoción se evaluó midiendo la cantidad residual de contaminantes según Klibanov et al., 1980. En la mayoría de los casos las isoperoxidasas básicas y neutras purificadas de ambos cultivos mostraron mayor eficiencia de remoción de fenol y 2,4-DCF que las ácidas, resultados consistentes con las mayores eficiencias catalíticas (Ecat) para esos sustratos obtenidas para este grupo. La actividad peroxidasa post-remoción siempre resultó más elevada en los tratamientos con las isoperoxidasas ácidas comparadas con las básicas y neutras de ambos cultivos, en presencia de los dos contaminantes. Esto indicaría que las isoenzimas básicas y neutras participarían más activamente en el proceso de remoción inactivándose en el proceso, mientras que las isoperoxidasas ácidas tendrían mayor resistencia a la inactivación. Por esta razón, estas últimas serían importantes en los procesos en donde la biomasa se utiliza en repetidos ciclos de detoxificación. Apoyos: SECYT UNRC-FONCYT-CONICET González P., Busto V., Agostini E., Milrad S. Dpto Biología Molecular. FCEFQyN. UNRC. Córdoba. pgonzalez@exa.unrc.edu.ar ., Busto V., Agostini E., Milrad S. Dpto Biología Molecular. FCEFQyN. UNRC. Córdoba. pgonzalez@exa.unrc.edu.ar Las peroxidasas (Px) han sido objeto de numerosos estudios debido a sus importantes roles fisiológicos y a sus numerosas aplicaciones industriales. Se han utilizado en remoción de fenol y 2,4-diclorofenol (2,4-DCF), compuestos de gran toxicidad presentes en efluentes de varias industrias. En estudios previos hemos utilizado cultivos de raíces transformadas de nabo (RTN) y tomate (RTT) como fuente de Px para la remoción de estos compuestos. El objetivo de este trabajo fue estudiar y caracterizar bioquímicamente ese proceso mediante el uso de Px purificadas a partir de cultivos de RTN y RTT. Se purificaron isoenzimas de Px por cromatografía de intercambio iónico a partir de extractos totales de RT. Las fracciones eluídas fueron analizadas por isoelectroenfoque que reveló la presencia de diferentes isoperoxidasas: básicas, neutras y ácidas. Con estas isoenzimas se efectuaron ensayos de remoción, incubando una hora con H2O2 1mM y 10 mg/l de los contaminantes. La eficiencia de remoción se evaluó midiendo la cantidad residual de contaminantes según Klibanov et al., 1980. En la mayoría de los casos las isoperoxidasas básicas y neutras purificadas de ambos cultivos mostraron mayor eficiencia de remoción de fenol y 2,4-DCF que las ácidas, resultados consistentes con las mayores eficiencias catalíticas (Ecat) para esos sustratos obtenidas para este grupo. La actividad peroxidasa post-remoción siempre resultó más elevada en los tratamientos con las isoperoxidasas ácidas comparadas con las básicas y neutras de ambos cultivos, en presencia de los dos contaminantes. Esto indicaría que las isoenzimas básicas y neutras participarían más activamente en el proceso de remoción inactivándose en el proceso, mientras que las isoperoxidasas ácidas tendrían mayor resistencia a la inactivación. Por esta razón, estas últimas serían importantes en los procesos en donde la biomasa se utiliza en repetidos ciclos de detoxificación. Apoyos: SECYT UNRC-FONCYT-CONICET