Caracterización de la oxidación de trans-Resveratrol por medio de una peroxidasa básica de nabo

GRANERO MA, AGOSTINIE, MILRAD S, FERNANDEZ H Y ZON MA

termas de Río Hondo, Sgo del Estero

Congreso; XIV Congreso argentino de Físico-Química y Química Inorgánica; 2005

Sociedad Argentina de Fisico-Química y Química Inorgánica

OXIDACION DEL ANTIOXIDANTE TRANS RESVERATROL MEDIANTE PEROXIDASAS EXTRAIDAS DE NABO A.M Granero*, E. Agostini**, S. Milrad**, H. Fernández*, M. A. Zón*. *Departamento de Química, ** Departamento de Biología Molecular, Facultad de Ciencias Exactas, Físico-Químicas y Naturales. Universidad Nacional de Río Cuarto. Agencia Postal N° 3. (5800)-Río Cuarto, Argentina. El antioxidante trans resveratrol ó trans 3,5,4’-trihidroxi estilbeno (t-Res) es una fitoalexina sintetizada por diversas plantas. Estimula la resistencia a la infección fúngica y se encuentra en elevada concentración en una variedad de uvas (Vitis vinifera), que lo sintetiza en respuesta a la infección producida por el hongo Botrytis cinerea. Por otro lado, las peroxidasas, glicoproteínas con un grupo prostético hemo (EC 1.11.1.7,H2O2-oxidoreductasas) son probablemente las enzimas más estudiadas, pero también las menos comprendidas. En presencia de H2O2 y substratos fenólicos, las peroxidasas llevan a cabo el ciclo peroxidativo. Estas enzimas se pueden clasificar en ácidas (aniónicas) ó básicas (catiónicas) según los valores del pH de su punto isoeléctrico. Se espera que el t-Res, que posee especies fenólicas en su estructura molecular, pueda ser utilizado como substrato por las peroxidasas. En este trabajo se demuestra la afinidad de las peroxidasas básicas de nabo hacia el t-Res, como una primera etapa para estudiar en el futuro posibles aplicaciones analíticas, en particular, la construcción de biosensores para detectar y cuantificar este antioxidante en diversas muestras de origen natural que lo contengan. Las enzimas son extraídas a partir de nabos, según un procedimiento descripto en la literatura. Ellas se purifican empleando la técnica de cromatografía de intercambio iónico. Las propiedades catalíticas de las enzimas, hacia la oxidación de t-Res, se determinan mediante medidas de espectroscopía uv-visible. Así, se registran los espectros de absorción uv-visible de t-Res en el medio de reacción seleccionado a los efectos de elegir la o las longitudes de ondas más adecuadas para realizar el estudio cinético. La reacción enzimática se sigue luego a esas longitudes de onda, observando la disminución de la banda de absorción principal de t-Res con el tiempo. Se emplea el método de las velocidades iniciales (vi) para determinar la velocidad de reacción bajo las diferentes condiciones experimentales. Se analiza el efecto de la concentración de la enzima sobre la cinética de la reacción. Se realizan experimentos a diferentes concentraciones de t-Res manteniendo constante la concentración de H2O2, como así también a diferentes concentraciones de H2O2 manteniendo constante la concentración de t-Res. Se encuentra en todos los casos un comportamiento del tipo Michaelis Menten. Se determinan la constante aparente de Michaelis Menten y la velocidad máxima, como así también los parámetros cinéticos del ciclo peroxidativo. Sección F: Biofisicoquímica y Bioinorgánica