Técnicas moleculares basadas en PCR para el estudio de hongos en alimentos: Detección de hongos aflatoxicogénicos en cereales y oleaginosas

REYNOSO M.M.; RAMIREZ M.L.; CHULZE S.N.

Manual de metodos moleculares para estudios microbiolgicos

EUDUNNE/CORPUS

Lugar: Autonoma de Buenos Aires; Año: 2011; p. 183 - 188

La reacción en cadena de la polimerasa (polymerase chain reaction, PCR) es un método poderoso con amplias aplicaciones en la biología molecular. Dicha técnica tiene varias aplicaciones en micología, incluyendo genética y sistemática fúngica, ecología y microbiología de suelo, patología vegetal, micología médica, biotecnología fúngica y muchas otras. Debido a que la mayoría de los patógenos fúngicos son difíciles de identificar en base sólo a las características morfológicas, y que la identificación morfológica consume demasiado tiempo y requiere de conocimiento previo en taxonomía, es que las técnicas basadas en PCR se han convertido en una herramienta poderosa para el diagnóstico rápido de hongos fitopatógenos y micotoxicogénicos. Para la detección de hongos fitopatógenos y micotoxicogénicos, la elección de los métodos de extracción de ADN depende del tipo de muestra. Para la identificación de un patógeno a partir de cultivos puros, en la mayoría de los casos, es posible obtener ADN templado de calidad usando métodos tradicionales que implican la lisis de las células y  la solubilización del ADN seguido de la remoción de contaminantes (proteínas, ARN y otras moléculas) a través de métodos enzimáticos o químicos. En cambio, la detección del patógeno a partir de tejidos, suelo, aire o agua, requiere de procedimientos de extracción de ADN más complejos a fin de eliminar ciertos inhibidores presentes en dichas muestras. Con este propósito, en la última década, se ha incrementado el uso de kits comerciales para el aislamiento y purificación de ADN: kits que usan columnas de intercambio iónico,  otros basados en la unión del ADN a perlas de vidrio, entre otros. Dichos métodos, tienen la ventaja de que son más rápidos y se requiere menos experiencia.