Determinación de triamtereno y su principal metabolito en orina

GABRIELA IBAÑEZ; GRACIELA ESCANDAR; A. ESPINOSA MANSILLA; A. MUÑOZ DE LA PEÑA

Niteroi

Congreso; 3ª Encontro Nacional de Química Analítica. 1º Congreso Ibero-Americano de Química Analítica.; 2005

Universidad Federal Fluminense

        Triamtereno (6- fenil-2,4,7-pteridintriamina) (TA) es un compuesto perteneciente a la familia de los diuréticos ahorradores de potasio. Usualmente, se administra asociado a otros diuréticos de acción más potente, derivados de compuestos tiazídicos o ácido antranílico, tales como furosemida e hidroclorotiazida [1]. Por otra parte, TA ha sido incluido en el listado de drogas prohibidas por el Comité Olímpico Internacional [2].       El sulfato de hidroxitriamtereno (STA), principal metabolito de TA, también presenta actividad farmacológica y su concentración en orina puede ser 4 a 13 veces superior a la de TA. Debido a esto resulta de interés la determinación de ambos compuestos en medios biológicos [3].         Para la determinación de TA se han informado métodos espectrofotométricos, cromatográficos, espectrofluorométricos [1], electroforesis capilar [3], entre otros. Recientemente, se ha publicado un método en flujo con detección espectrofluorométrica del compuesto retenido en fase sólida (Sephadex) [4].         Los métodos basados en espectrometría luminiscente en matrices sólidas (ELMS) representan una forma sensible, selectiva y de bajo costo de caracterizar y determinar una gran variedad de compuestos orgánicos e inorgánicos a nivel de trazas [5]. Una metodología relativamente nueva y fácil de implementar utilizando ELMS consiste en retener el compuesto en estudio en una membrana de fase reversa C18 y determinarlo en la superficie sólida con una técnica luminiscente. Los compuestos no retenidos por el disco pasan al extracto donde pueden o no ser analizados de acuerdo a su interés. Esta estrategia se utilizó para la determinación de compuestos aromáticos cíclicos en aguas naturales [6] y en el análisis de antiinflamatorios en fármacos y suero [7,8].         Debido al importante solapamiento espectral (tanto en absorción como en emisión) que presentan ambos compuestos en el rango de pH de 2-12 los mismos no pueden ser determinados espectroscópicamente empleando métodos quimiométricos de calibración multivariada. Para la determinación simultánea de ambos componentes sólo se hallan descritos métodos cromatográficos [9] y electroforesis capilar [3].         En el presente trabajo se describe un método rápido y simple, sin pre-tratamiento, para la separación y determinación espectrofluorométrica de TA y STA en orina empleando membranas de fase reversa C18. En este método, a pH 9, el TA, en su forma neutra, es retenido en la membrana y su metabolito, con carga negativa, no es retenido pasando al extracto. TA es cuantificado a partir de la medida de fluorescencia en la superficie sólida, mientras que STA es determinado en base a la fluorescencia de la solución emergente.             Las soluciones empleadas en las curvas de calibración fueron obtenidas por diluciones apropiadas de soluciones acuosas stock (2 mg ml?1)  al pH de trabajo de manera de obtener concentraciones en el rango 0?40 ng ml?1 y 0?120 mg ml?1 para TA y STA respectivamente. Los rangos lineales y los límites de detección (calculados de acuerdo a Clayton) fueron: 2.3?20 ng ml?1 y 0.8 ng ml?1 para TA y 8.2-120 ng ml?1 y 2.8 ng ml?1 para STA. Por otra parte, se prepararon muestras de orinas adicionadas a diferentes niveles de concentración siguiendo un diseño al azar en el rango de concentraciones normales de los compuestos en orina luego de la administración de una dosis de 50 mg de TA. Luego de una dilución apropiada (pH=9), de manera obtener una concentración final de ambos analitos en el rango lineal correspondiente, la solución se pasó por la membrana de C18 realizándose la medida de fluorescencia de TA en la superficie sólida y la de STA en la solución emergente. Los resultados se compararon con los obtenidos por cromatografía líquida de alta resolución. [1] M. L. Luis, J. M. G. Fraga, A. I. Jiménez, F. Jiménez, O. Hernández, J. J. Arias, Talanta 62 (2) (2004) 307. [2] R. Ventura, J. Segura, J. Chromatogr. B: Biomedical Applications. Rev. 687 (1996) 127. [3] C. Horstkötter, S. Kober, H. Spahn-Langguth, E. Mutschler, G. Blaschke, J. Chromatogr. B. 769 (2002) 107. [4] A. Domínguez-Vidal, P. Ortega-Barrales, A. Molina-Diaz, J. Pharm. Biomed. Anal. 28 (2002) 721. [5] R. J. Hurtubise, Anal. Chim. Acta 351 (1997) 1. [6]  J.L. Whitcomb, A.D. Campiglia, Talanta 55 (2001) 509. [8] G.M. Escandar, A.J. Bystol, A.D. Campiglia, Anal. Chim. Acta 466 (2002) 275. [9] G. A. Ibáñez, G. M. Escandar, J. Pharm. Biomed. Anal. 37 (2005) 149. [10] K. J. Swart, H. Botha, J. Chromatogr. 413 (1987) 315.