Fotoinactivación de biopelículas bacterianas empleando una porfirina sintética y tratameinto fototérmico con láser 980 nm.

ARRAYGADA C; CERVINI BOHM, G; CALVO, G; VALLECORSA P; SAENZ, D; DI VENOSA G; DURANTINI E; BUZZOLA, FR; CASAS,A; MAMONE,L

Encuentro; III Reunión de fotobiólogos moleculares de Argentina GRAFOB del Bicentenario; 2016

La Foto-Inactivación Bacteriana (FIB) es un tratamiento antimicrobiano, donde se emplea unamolécula fotosensibilizante (FS), que luego de ser irradiada con luz visible genera especiesreactivas del oxígeno y el consecuente daño sobre los microorganismos a eliminar. Por otraparte, las infecciones sobre dispositivos médicos implantados en el cuerpo humanorepresentan un problema clínico de suma importancia, debiéndose la mayoría de ellas, a laformación de biopelículas sobre la superficie de los implantes y la consecuente infección delos tejidos circundantes. La FIB se ha empleado en la erradicación de biopelículas presentes enplacas dentales e implantes orales, y se ha propuesto su uso en catéteres colonizados. En estetrabajo evaluamos la acción de la porfirina: 5,10,15,20-tetrakis[4-(3-N,Ndimetilaminopropoxi)fenil]porfirina (TAPP) como FS en biopelículas de S. aureus, E. faecalis y S. epidermidiscrecidas sobre placas de titanio (material empleado usualmente enimplantes odontológicos).Con el fin de potenciar los efectos de la FIB, pre-tratamos (posteriormente a la aplicación delFS) las biopelículas con un láser de 980 nm y luego lasexpusimos a una fuente de luz blanca.Trabajamos con biopelículas de 24 hs, crecidas sobre placas de titanio con 4diferentesrecubrimientos (desbaste con lija al agua, ataque ácido (5% HNO3 / 0,5% HF),anodizado enfosfato monoácido y recubrimiento de Ca y P), o bien crecidas sobre placas depoliestireno. Luego de incubarlas en oscuridad a diferentes dosis de TAPP (0,1 ? 5 μM), lastratamos con el láser de 980 nm (10-30 W) y posteriormente las irradiamos con una fuente deluz blanca no coherente (165 J cm-2). La determinación de la efectividad de los diferentestratamientos se realizó mediante recuento de UFC/ml. Finalmente determinamos laincorporación del FS por parte de las biopelículas en los diferentes tratamientos, mediantetécnicas fluorimétricas. No observamos diferencias significativas en el crecimiento de lasbiopelículas sobre los diferentes recubrimientos de las placas de titanio. La FIB realizada apartir de TAPP a concentraciones entre 0,5 y 5 μM resulto efectiva en la reducción de laviabilidad de las biopelículas de las tres cepas analizadas, reduciendo 2 log la supervivenciabacteriana en relación a los controles no tratados (p< 0,01, Mann-Whitney test).El tratamiento previo con el láser de 980 nm, incremento en un log el efecto bactericida de laFIB sobre las biopelículas.El FS incorporado por las bacterias se encuentra en el rango de los 0,05 a 0,1 fmoles / UFC.Los resultados obtenidos indican que la FIB a partir de TAPP resulta un tratamiento(alternativo al uso de antibióticos) efectivo en la eliminación de bacterias formadorasdebiopelículas sobre superficies de titanio empleadas en implantes de uso clínico. El pretratamiento fototérmico de las biopelículas, a su vez, sensibilizaría las biopelículas