Caracterización de PchP de Pseudomonas aeuruginosa en medios organizados

CECICLIA CHALLIER; PAOLA BEASSONI; A. TERESITA LISA; M.A. BIASUTTI

Jornada; XVII Jornadas Científicas de la Sociedad de Biología de Córdoba; 2009

Pseudomonas aeruginosa es un patógeno oportunista responsable de infecciones crónicas y representa un problema importante en pacientes que presenten enfermedades con compromiso inmunológico. En tal sentido, PchP es un potencial blanco farmacológico. PchP cataliza la hidrólisis de fosforilcolina en colina y fosfato, dicha reacción ha sido previamente estudiada, en nuestro grupo en medio homogéneo. El objeto del presente trabajo es realizar un estudio comparativo del comportamiento de PchP en medio homogéneo y en medios organizados. La cinética de la reacción enzimática fue monitoreada por la formación de p-nitro fenol (pNP) siguiendo la absorbancia a 410 nm después de la hidrólisis de p-nitro fenil fosfato (pNPP) a pH5 en presencia de Mg2+. Se utilizaron dos surfactantes: BHDC para micelas inversas y tritonX-100 para micelas directas. En medio homogéneo, PchP sigue un comportamiento de Michaellis-Menten, obteniéndose los parámetros Km, kcat y la eficiencia catalitica. En BHDC se observo que el surfactante es un inhibidor competitivo de la enzima. Por otro lado, se encontró que Triton parece activar a PchP en concentraciones submicelares. También se determinaron los tiempos de vida de fluorescencia y anisotropía (r) del fluoróforo intrínseco (Trp) de PchP. Los resultados indican diferentes micropolaridades y microviscocidades de los medios estudiados.