Fotooxidacion de alfa-Quimotripsina mediada por O2 (1¦¤g) en micelas inversas de AOT

REYNOSO, M. EUGENIA; GARCIA, NORMAN; BIASUTTI, M. ALICIA

Santiago del Estero

Congreso; XIV CONGRESO ARGENTINO DE FISICOQUIMICA y QUIMICA INORGANICA; 2005

Las proteínas son el principal sitio de ataque por O2(1Δg) en células y su fotooxidación en diferentes condiciones experimentales de pH y microentornos, constituye un tópico de gran interés. α-Quimotripsina pertenece al grupo de enzimas proteolíticas y contiene varios aminoácidos fotooxidables: Histidina, Triptofano, Metionina, Tirosina y Cisteina. Si bien las micelas inversas constituyen un modelo sobresimplificado de membranas biológicas, se espera que la gran región interfacial provista por estos sistemas pueda ejercer algún efecto sobre procesos de reacción, como resultado del hecho que en estos medios la esencia amfipática de la membrana se preserva. En este contexto, se llevó a cabo el estudio de la fotooxidación de α-Quimotripsina en solución acuosa y en micelas inversas de 1,4 – bis- (2-etilhexil) sulfosuccinato de sodio (AOT) en n-heptano utilizando perinaftenona (PN) como sensibilizador, para generar la especie reactiva O2 (1Δg),). En el medio micelar se trabajó variando [AOT] a W (=[H2O]/ [AOT]) cte =13 con el objeto de investigar la influencia del incremento en la concentración de micelas sobre la fotoxidación de la proteína, encapsulada en el interior de la laguna acuosa del agregado. El posible efecto del incremento en el tamaño de dicha laguna se investigó variando W a [AOT] = cte. Se determinaron las constantes reactivas (kr) midiendo consumo de oxígeno y/o consumo de sustrato por fluorescencia, mientras que las constantes totales se determinaron a través de la fosforescencia de O2(1Δg) resuelta en el tiempo. Los experimentos se realizaron a pH 8, valor al cual la proteína presenta su mayor actividad enzimática, y a pH 11 encontrándose un aumento en la reactividad a pH 11 debido a la mayor contribución del residuo de Tirosina.