EVALUACIÓN DE UNA PROTEÍNA DE Trypanosoma cruzi COMO POSIBLE MARCADOR DIAGNÓSTICO

VASCONI MARÍA DELIA; PERDOMO VIRGINIA; NIEZ MARÍA FLORENCIA ; CRIBB PAMELA

Rosario

Congreso; XXI Congreso y XXXIX Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario 2019; 2019

Sociedad de Biología de Rosario

La enfermedad de Chagas es causada por el parásito Trypanosoma cruzi y afecta a millones de personas principalmente en América Latina. Consta de una fase aguda generalmente asociada a una elevada parasitemia que puede ser sintomática, oligosintomática o asintomática y una fase crónica, donde disminuyen los parásitos circulantes y pueden o no presentarse síntomas o patologías asociadas. El diagnóstico en la fase aguda se realiza principalmente mediante la detección directa de parásitos en sangre (Strout, microhematocrito, gota gruesa), y en algunos casos por métodos moleculares (PCR). Las técnicas serológicas que incluyen ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), IFI (imnufluorescencia indirecta) y HAI (hemaglutinación indirecta), se basan en la detección de las inmunoglobulinas G (IgG) anti-T. cruzi en la sangre de los pacientes y se utilizan para el diagnóstico en la fase crónica. Una sola prueba no es lo suficientemente sensible y específica para hacer el diagnóstico, por lo cual se requieren al menos dos resultados concordantes mediante diferentes técnicas y que detecten anticuerpos de diferentes antígenos. Si bien existe tratamiento para la Enfermedad de Chagas, éste es efectivo durante la fase aguda mientras que su eficacia en la fase crónica es controversial. De allí, se destaca la importancia de un diagnóstico temprano y sensible. En nuestro laboratorio previamente observamos que una proteína de Trypanosoma cruzi, a la que llamamos ?Proteína TcX?, es capaz de activar macrófagos de la línea celular RAW in vitro e inducir la producción de mediadores inflamatorios. Además, TcX se encontró en el sobrenadante de cultivo de las células infectadas con T. cruzi, lo que sugiere que la proteína sería secretada al espacio extracelular por las células infectadas. Así, decidimos evaluar si TcX podría ser considerada un marcador de infección y si se puede ser un buen antígeno para el diseño de un método de diagnóstico serológico. En primer lugar, nos propusimos evaluar la presencia de aticuerpos específicos contra TcX en sueros de pacientes Chagásicos. Para ello, expresamos la proteína TcX en E. coli como fusión a GST para facilitar su purificación mediante cromatografía de afinidad. Así obtuvimos TcX:GST recombinante, la cual fue inmobilizada en un membrana de nitrocelulosa. Luego, se ensayaron mediante western blot 100 sueros que habían sido remitidos al servicio de Parasitología de la FCByF para determinación de Chagas mediante InmunoFluorescencia (IFI). Distintas diluciones de los sueros se incubaron con la proteína inmobilizada en la membrana, se lavó exhaustivamente y luego se incubaron con anti-IgG humana conjugada a peroxidasa y se reveló mediante quimioluminiscencia. Se detectaron bandas inmunoreactivas en un 50-80% de los sueros ensayados, dependiendo de las diluciones utilizadas y las condiciones de incubación. Como controles, se inmobilizaron en nitrocelulosa, la proteína GST recombinante y extractos totales de T. cruzi y de E. coli, demostrando la especifidad para la proteína TcX. La comparación con los resultados previos mediante IFI, hemaglutinación y/o ELISA sugieren que TcX podría ser un buen antígeno para diagnóstico, en algunos casos presentando sensibilidades mayores que los métodos actualmente utilizados en nuestro medio.