Evaluación de los efectos de la ingesta crónica de etanol en ratones exocriados CF-1 aplicando test de micronúcleo y morfología gamética

CEBRAL E; ABREVAYA X; MUDRY MD

Santa Fe

Congreso; III Congreso Argentino de la Sociedad de Toxicología y Química Ambiental (SETAC). (VII Reunión SETAC en Argentina; 2010

SETAC

Los riesgos y consecuencias clínicas y psico-sociales del abuso de bebidas alcohólicas están ampliamente estudiados aunque la genotoxicidad por consumo de alcohol aún es controvertida y de escasa documentación. En esta oportunidad se evaluaron los efectos de la ingesta crónica moderada de etanol en un modelo murino exocriado utilizando el test de micronúcleos (frecuencia de MN) en médula ósea y como biomarcador de toxicidad germinal, la morfología gamética. Se administró etanol al 10% m/v en el agua de bebida a hembras y machos CF-1 adultos por 27 días (grupos HT y MT). Los controles recibieron agua ad libitum (HC y MC). Se determinaron los pesos iniciales y finales, la ingesta sólida y líquida diaria y niveles de alcoholemia (BAC) al término de los tratamientos. Otro grupo de hembras CF-1 recibió 10% de etanol en el agua de bebida (HPT) o agua pura (HPC) por 17 días antes de la gestación. Al día 15 y 17 se indujo la ovulación (PMSG/hCG) y se aparearon con MC. Las hembras preñadas continuaron la ingesta de 10% de etanol (HPT) o (HPC) hasta el día 10 días de gestación. Se analizó la frecuencia de MN en eritrocitos policromáticos de médula ósea (MN-PCE/1000/ratón, ANOVA 2 factores) y se evaluaron los MN en estado gestacional en el paradigma periconcepcional de ingesta de alcohol. Se recuperaron espermatozoides del deferente en Krebs y se prepararon frotis teñidos con SPERMAC para evaluar anormalidades morfológicas de cabeza, acrosoma y flagelo (% promedio espermatozoides/ratón ± ES). Se colectaron oocitos oviductales por punción ampular, se dispersaron las células del cúmulo con hialuronidasa (1 mg/ml) e incubaron con Hoescht 33342 (visualización nuclear). Se cuantificaron el nro. oocitos/hembra (Test de Student) y los tipos oocitarios (microscopía de contraste de fase y fluorescencia, Chi cuadrado) como: inmaduros, intactos maduros (Metafase II), activados (II cuerpo polar y pronúcleo), fragmentados/lisados, anormales, ZP vacía. No se observaron variaciones en los pesos (finales vs iniciales) en todos los grupos T vs C. Los niveles de BACs fueron de 19-28 mg/dl. Las frecuencias de MN fueron: MT: 13.91 ± 3.59 vs MC 5.93 ± 1.90 (p<0.01); HT: 10.96 ± 2.3 vs HC: 6.70 ± 1.86 (p<0.01) y HPT: 11.83 ± 3.19 vs HPC: 5.42 ± 0.91 (p<0.01). Se encontró elevado % de espermatozoides anormales en MT vs MC (p<0.001). Las HT mostraron baja tasa ovulatoria (p<0.01) y elevado % de oocitos activados-partenogenéticos vs MC (p<0.001). En ratones CF-1, la ingesta crónica moderada de etanol provoca aumento de la frecuencia de MN en machos y hembras preñadas y no preñadas, efecto genotóxico que se relacionaría con la alteración morfológica de la cabeza espermática y con anomalías nucleares-cromosómicas del oocito sugiriendo efectos aneugénicos o clastogénicos en las células germinales en las condiciones y diseño empleados.