RSUME regula la respuesta a hipoxia mediada por HIF-1

GEREZ J.; FUERTES, M.; DRUKER, J.; HAEDO, M.; PAEZ PEREDA, M.; HOLSBOER F.; SILBERSTEIN, S.; ARZT, E.

18-21 de Noviembre de 2009 Mar del Plata.

Congreso; LIV Reunión de la Sociedad Argentina de Investigacion Clinica; 2009

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

RSUME, una proteína cuyo gen fue clonado en nuestro laboratorio, estimula la SUMOilación. La expresión de HIF-1alfa, subunidad principal del factor de transcripción mas importante en la respuesta adaptativa a hipoxia HIF-1, esta finamente regulada ya que en normoxia es reconocido por la enzima E3 Ubiquitin ligasa VHL, la cual cataliza su ubiquitinación conduciendo a su degradación por el proteosoma. En hipoxia este reconocimiento no ocurre, HIF-1alfa se estabiliza y HIF-1 aumenta su actividad transcripcional. En este trabajo estudiamos la función de RSUME sobre HIF-1alfa y su consecuencia fisiológica. Demostramos por RT-PCR en células COS7 que RSUME es inducido 2.5 veces tras 16hs de hipoxia y 2 veces si se sobreexpresa HIF-1alfa. Empleando genes reporteros con la zona promotora del gen de RSUME confirmamos que esta regulación es a nivel transcripcional (p<0.05). La deleción de los sitios HRE en estas construcciones suprimen tanto los efectos de hipoxia como de la sobreexpresión de HIF-1alfa, indicando que estos efectos estan mediados por HIF-1. A su vez, RSUME aumenta la estabilidad de HIF-1alfa en hipoxia y en normoxia, sin modificar sus niveles de ARNm. En ensayos de Western Blot demostramos que RSUME aumenta la estabilidad de HIF-1alfa a pesar de la sobreexpresión de VHL. Estos resultados fueron reconfirmados empleando una construcción reportera que posee el dominio sensible a Oxígeno de HIF-1alfa fusionado a Luciferasa. RSUME  aumenta la actividad transcripcional de HIF-1 un 200% (p<0.05). Al emplear siRNAs específicos para RSUME tanto el aumento de HIF-1alfa inducido por hipoxia como la actividad transcripcional de HIF-1 disminuyen 53% y 59% respectivamente. Mediante ensayos de inmunoprecipitación demostramos que RSUME interacciona físicamente con HIF-1alfa y aumenta su SUMOilación. Concluimos que RSUME es inducido en hipoxia para aumentar la estabilidad de HIF-1alfa, cumpliendo un rol muy importante en la respuesta adaptativa a hipoxia.