Glycogen synthase kinase 3 (GSK-3) as a novel regulator of alternative splicing

MANUEL J MUÑOZ; CARMEN CUENCA; ALBERTO R KORNBLIHTT; FLORENCIA VILLAFÁÑEZ; GASTÓN SORIA; NICOLÁS NIETO MORENO

Buenos Aires

Workshop; Workshop Biología Celular y Molecular del ARN; 2018

Instituto Leloir y Club del RNA

En nuestro laboratorio estudiamos la respuesta transcripcional y de splicing alternativo (SA) al daño al ADN producido por luz ultravioleta (UV) en células humanas en cultivo. Las lesiones en el ADN producidas por la luz UV provocan una cascada de transducción de señales que finaliza en la hiperfosforilación de la RNA polimerasa II (RNAPII) y una reducción en la tasa de elongación. Esto produce cambios en los patrones de SA en el marco del modelo de acoplamiento cinético entre la transcripción y el SA. Para identificar qué factores vinculan las lesiones en el ADN con la RNAPII desarrollamos un sistema reportero fluorescente de SA que permite conocer la regulación del SA de forma rápida y sencilla: consiste en un minigén inducible que expresa las proteínas GFP o dsRed según se incluya o no un exón alternativo. Con este reportero, realizamos un screening con 686 inhibidores de quinasas del Public Kinase Inhibitor Set (PKIS2 library) de GlaxoSmithKline. De los 686 inhibidores analizados, sólo 14 demostraron tener un efecto en la regulación del SA en respuesta a UV. En particular, la glucógeno sintetasa kinasa 3 (GSK-3) es un blanco común a cerca de la mitad de los inhibidores. Por lo tanto, nos centramos en el estudio del rol de GSK-3 en la regulación del SA, primeramente trabajando con inhibidores altamente específicos, y luego con células en las que eliminamos la expresión de las isoformas a y b de GSK-3, provenientes de dos genes parálogos, mediante la tecnología CRISPR.