Las Células Cromafines de Ratón Poseen una Vía Rápida de Recuperación del “Pool” Liberable de Vesículas Secretorias

PEREZ BAY AE; MARENGO FD

Cordoba, Argentina

Taller; IX Curso y Taller Argentino de Neurociencias; 2007

Taller Argentino de Neurociencias

Luego de la exocitosis, las células neuroendocrinas deben mantener la superficie de membrana y recuperar los "pools" de vesículas deplecionados. Para ello utilizan diversos mecanismos endocitícos, los cuales impactan de diferente manera en la velocidad de recuperación vesicular. Previamente habíamos determinado en células cromafines de ratón que luego de una estimulación que genera una exocitosis masiva (con K+ 50mM en presencia de Ca++ 2mM durante 3 min.), se fusiona una cantidad de membrana igual al 51% de la superficie total de membrana plasmática; las células endocitan una cantidad equivalente a la que se fusionó pero ante la aplicación de un segundo estímulo menos de la mitad de la membrana recuperada  es liberada nuevamente. En este trabajo, las técnicas de microscopia  de fluorescencia para marcadores de membrana de tipo FM  se combinaron con métodos que nos permitieran acelerar el lavado del FM1-43 extracelular luego del primer evento exocitótico, de modo de reducir el retardo con que se puede medir la liberación de FM1-43 frente al segundo estímulo, que es nuestra medida de la recuperación vesicular. Con esto se pretendió estudiar la velocidad con que la membrana endocitada es ciclada y vuelta apta para la liberación. Se utilizaron dos estrategias que permitieron reducir el tiempo entre estímulos  a 5 o 2 minutos: 1) se aplicó un quelante del FM que favorece el lavado rápido del fluoróforo; 2) se aplicó un "quencher" que bloquea la fluorescencia del FM extracelular pero no afecta a la del intracelular. Los resultados obtenidos indican que la membrana endocitada en respuesta a un proceso exocítico requiere de un tiempo inferior a 2 min para ser ciclada, pudiendo ser re-liberada si se induce otro "round" de exocitosis luego de ese lapso. Los resultados observados fueron corroborados también utilizando un estímulo más fisiológico (agonistas nicotínicos), donde la  membrana fusionada (20% de la superficie total de membrana plasmática) es endocitada y reciclada completamente hacia un "pool" liberable en corto plazo.