PARTICIPACIÓN DE RSPO3 EN EL MANTENIMIENTO DEL FENOTIPO BASAL DEL EPITELIO MAMARIO MURINO

TOCCI J; FELCHER C; GODDIO MV; KORDON E

Mar del Plata

Congreso; LIX REUNIÓN CIENTÍFICA ANUAL Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2014

Los genes R-spondins (Rspos) codifican para proteínas de secreción que modulan las vías de señalización WNT. Están involucrados en el desarrollo embrionario, diferenciación de tejidos, diversas patologías y se los postula como factores de crecimiento de células stem. Se determinó que los Rspos, en particular Rspo3, aparecen frecuentemente mutados y sobre-expresados en tumores inducidos por el virus del tumor mamario murino (MMTV), lo cual promueve la transformación de células mamarias. Previamente demostramos que Rspo3 puede ser expresado por células mamarias, no infectadas por MMTV, que presentan marcadores basales/mesenquimales. Con estos antecedentes, nos propusimos probar que la población basal del epitelio mamario murino normal, enriquecido en células stem, expresa Rspo3. Para ello, se obtuvieron glándulas mamarias de hembras C57/BI6 vírgenes y se separaron las diferentes poblaciones celulares mediante citometría de flujo. Los resultados obtenidos por qRT-PCR indican que la subpoblación mesenquimal (Lin-/CD24-/CD29+) y basal enriquecida en stem (Lin-/CD24+/CD29hi) expresan Rspo3, pero no así la población luminal. En líneas celulares tumorales que expresan este factor detectamos su presencia por Western-blot en el medio condicionado (MC). Además, corroboramos que Rspo3 se asocia a la matriz extracelular y/o a la membrana celular, ya que el MC puede ser enriquecido por el tratamiento del cultivo con heparina. Por otro lado, al transfectar células SCg6 de manera estable con un shRNA específico, se incrementa la expresión de marcadores epiteliales (como E-cadherina) y disminuyen los mesenquimales (como Vimentina), por análisis de qRT-PCR, y se inhibe la capacidad migratoria de estas células (por ?cierre de herida?). Estos resultados sugieren que Rspo3 participaría del mantenimiento de la población mamaria basal y, posiblemente, también de las células stem en la mama normal, y su sobre-expresión en la población luminal facilitaría el desarrollo tumoral.