Asociación física y antagonismo mutuo entre el factor de transcripcion (FT) T-bet y el receptor de glucocorticoides (GR).

LIBERMAN, A.C.; DRUKER, J.; REFOJO, D.; REIN, T.; HOLSBOER, F.; ARZT, E.

Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina

Congreso; LIV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2006

T-bet es clave para la adquisición del fentotipo Th1 y regula la expresión de la citoquina proinflamatoria INF-gamma. Previamente demostramos que los glucocorticoides (GCs) inhiben las respuestas Th1 inhibiendo la expresión y actividad transcripcional de T-bet. El objetivo de este trabajo es estudiar en profundidad el mecanismo molecular implicado en la interacción T-bet/GR. La expresión del mRNA y proteina de T-bet fue estudiada por Real-time PCR y Western Blot; la actividad transcripcional por ensayos de luciferina; el binding al DNA por EMSA y ChIP y la interacción proteína-proteína por coimunoprecipitacion. Previamente hemos demostrado por Northern Blot que GC inhiben el mRNA de T-bet. Este resultado fue corroborado y cuantificado por Real-time PCR mostrando un 70% de inhibición (p<0.01). Además los GC inhiben la expresión proteica de T-bet. Dado que GC inhiben la actividad transcripcional de T-bet (65%, p<0.01), quisimos saber si el proceso inverso también ocurría. Vimos que T-bet inhibe de manera concentración dependiente la actividad transcripcional de GR (25-75%, p<0.01). Ensayos de transfeccion utilizando mutantes de GR que transactivan pero no transreprimen (S425G) y viceversa (A458T) sugirieren que transrepresion seria el mecanismo involucrado en la inhibición. Ensayos de coimunoprecipitacion confirmaron que existe una asociación física entre GR y T-bet. Ensayos de EMSA y ChIP muestran que esta interacción impide el binding de T-bet al DNA. Además, analizamos las consecuencias funcionales de la interacción GR/T-bet en la regulación del promotor de INF-gamma y vimos que GC inhiben la actividad transcripcional de T-bet sobre el promotor INF-gamma de manera dosis dependiente (15-60%, p<0.01) al igual que la síntesis de INF-gamma. Concluimos que GCs inhiben las respuestas Th1 a través de la inhibición de T-bet a nivel de mRNA, proteína, actividad transcripcional y binding al DNA consecuencia de la interacción física entre GR y T-bet.