EGF aumenta los niveles de AMPc en células epiteliales mamarias murinas. Rol de la proteína CREB en la expresión de bcl-xL.

GRINMAN, D; ROMORINI, L.; DAVIO, C; PECCI, A.

mar del Plata

Congreso; LVIII Reunion Anual de SAIC; 2013

SAIC

Desde hace varios años, nuestro grupo estudia el mecanismo por el cuál EGF protege al epitelio mamario de la apoptosis. En ese sentido, hemos demostrado que las células epiteliales mamarias murinas HC11, ampliamente utilizadas como modelo de diferenciación y muerte celular, cuando llegan a confluencia entran en apoptosis si son incubadas en medio sin suero. Este efecto es prevenido por el agregado de EGF quien dispara, principalmente mediante la estimulación de la vía de supervivencia de PI3K/AKT, un conjunto de señales que promueven la expresión de la isoforma larga antiapoptótica del gen bcl-X (Bcl-xL). El incremento de los niveles de bcl-xL se correlaciona con la activación del Promotor 1 (P1) del gen. Mediante análisis in silico de una región cercana a P1 y por ensayos de transfecciones transitorias, encontramos que los factores CREB/ATF-1 podrían jugar un papel relevante en la activación de P1 mediada por EGF. En el presente trabajo nos dispusimos a evaluar su contribución en la activación del promotor P1 de bcl-x y el aumento de los niveles de bcl-xL. Mostramos que la proteína CREB se fosforila en respuesta a EGF en las células HC11, con un máximo alcanzado luego de 15 min de incubación con dicho factor. Demostramos que este incremento en la fosforilación no es afectado por bloqueantes de la actividad de AKT (como B2311 y A6730) pero, sorprendentemente, es bloqueado por los inhibidores específicos de PKA (H89 y RP-AMPc). Más aún, el tratamiento con EGF incrementa los niveles de AMPc de manera independiente del dominio catalítico del receptor de EGF Erb1. En su conjunto los resultados que presentamos sugieren un diálogo cruzado que involucra a la activación, por EGF, de una adenililciclasa por un mecanismo aún desconocido que conlleva a la activación del factor CREB, quien podría jugar un papel de modulador de la actividad de P1 y la consecuente expresión de bcl-xL.