Validación de un método espectrofluorimétrico supramolecular para la determinación de 6-hidroximelatonina en muestras reales

GUADALUPE G. MIÑAMBRES; GUILLERMO BRACAMONTE; ALICIA V. VEGLIA

Bahía Blanca, Buenos Aires, Argentina

Congreso; V Congreso Argentino de Química Analítica.; 2009

Asociación Argentina de Químicos Analíticos

VALIDACIÓN DE UN MÉTODO ESPECTROFLURIMÉTRICO SUPRAMOLECULAR  PARA LA DETERMINACIÓN DE                                            6-HIDROXIMELATONINA EN MUESTRAS REALES.     Guadalupe G. Miñambres, A. Guillermo Bracamonte y Alicia V. Veglia.   . Instituto de Investigaciones en Físico Química de Córdoba (INFIQC), Departamento de Química Orgánica, Facultad de Ciencias  Químicas, Universidad Nacional de Córdoba, Ciudad Universitaria. 5000 Córdoba, Argentina. E-mail:aveglia@dqo.fcq.unc.edu.ar.     En nuestro organismo, determinados compuestos orgánicos cumplen importantes roles biológicos, y tanto éstos como sus metabolitos requieren de métodos sencillos, sensibles y confiables para su determinación en fluidos biológicos. La melatonina (M) es una hormona natural del cerebro cuya principal función en el organismo del ser humano es regular los ritmos circadianos, sueño-vigilia. La M es producida por varios tejidos entre ellos se puede mencionar: glándula pineal, retina, macrófagos y el tracto gastrointestinal. La metabolización  produce principalmente      6-hidroximelatonina (6HM) que posteriormente es excretada por orina. Se ha determinado que la disminución de la excreción nocturna de 6HM en orina está relacionada con niveles de secreción de M en plasma por debajo de lo normal. Estos resultados son interpretados como que las cantidades de 6HM excretas son una buena medida de la secreción de M que está relacionada con desórdenes psiquiátricos. En nuestro grupo hemos estudiado la influencia de ciclodextrinas en las propiedades fluorescentes de indoles entre ellos la 6HM. Con este compuesto  se encontró interacción supramolecular utilizando como receptor la b-ciclodextrina  (CD) y la hidroxipropil-b-ciclodextrina (HPCD). Se observó intensificación de la señal fluorescente y un incremento en la sensibilidad de calibración con ambos receptores de 55% y 219%, respectivamente. El mejor limite de detección (LOD ng/mL) se obtuvo con la HPCD (0,71 ng/mL a pH=7,00 y 25ºC). Se analizó la aplicabilidad del método para la determinación de 6HM en fluidos biológicos (orina humana de adulto sano) por el método de adiciones estándares. Se obtuvieron buenos valores para las recuperaciones (95-109 %) de los fortificados de matrices procesadas por métodos convencionales  de literatura. Para corroborar la exactitud del método se estudió el efecto matriz aplicando el test t a dos colas con niveles de confianza del 95% a  los valores de recuperación promedio para  los siete niveles de fortificación. El resultado obtenido comprueba la existencia de un  efecto matriz que puede ser normalizado mediante la sensibilidad de calibración sobre matriz.