Complejo de proteínas retromero: primer aproximación al reciclado de receptores en Giardia lamblia.

MIRAS S; GOTTIG N; ROPOLO AS; TOUZ MC

Rosario

Jornada; SAP; 2013

El retrómero es un complejo proteico heteropentamérico que media el transporte retrógrado de los receptores de hidrolasas ácidas entre endosomas y la red trans-Golgi (TGN) y se encuentra conservado tanto en estructura como en función en una amplia diversidad de organismos eucariotas. A diferencia de lo que sucede en otros organismos, el sistema de endomembranas del trofozoíto de Giardia es simple y se compone sólo del Retículo Endoplasmático (RE) y Vesículas Periféricas (PVs), que pueden representar un sistema de organelas antiguas convergentes, con funciones de endosomas y lisosomas. La clasificación y el tráfico de proteínas de membrana y de hidrolasas solubles desde el RE a las PVs, han sido descritos como específicos y conservados. Sin embargo, la participación del complejo retrómero en el reciclado de los receptores de hidrolasas no había sido definida. Las proteínas del complejo retrómero, denominadas como proteínas de clasificación Vacuolar (Vacuolar protein sorting, Vps35p, Vps26p y Vps29p), están presentes en el genoma de Giardia. El objetivo de este trabajo es caracterizar este complejo proteico en Giardia. Así, el clonado de la subunidad GlVPS35 y la producción de antisueros, permitió determinar la localización de esta proteína en las PVs, como así también en el citosol. Por otro lado, la expresión de las tres subunidades GlVPS35, GlVPS26 y GlVPS29 como proteínas de fusión unidas a una etiqueta de hemaglutinina (HA) en el extremo C-terminal, se utilizó para demostrar la asociación de las subunidades con las membranas, su localización subcelular específica y el grado de interacción entre las diferentes subunidades del retrómero. Los datos obtenidos a partir de ensayos de interacción proteína-proteína, revelaron una asociación directa entre la subunidad mayor GlVPS35 y el receptor de hidrolasas solubles de Giardia, GlVps. En conjunto, estos resultados proporcionan información acerca de las interacciones moleculares que median el ensamblado del subcomplejo de selección de carga (subcomplejo GlVPS) del retrómero y de su participación en el reciclado del receptor de hidrolasas ácidas en este parásito