Alteraciones en la síntesis y/o secreción de proteínas de matriz extracelular por las células gliales de müller durante la degeneración de la retina en ratones rd1

ROTSTEIN, N.; POLITI, L.E.; VALLESE MAURIZI, H.; GERMAN, O.L.

Congreso; Oftalmocórdoba 2020; 2020

Alteraciones en la síntesis y/o secreción de proteínas de matriz extracelular por las células gliales de müller durante la degeneración de la retina en ratones rd1.En la retinitis pigmentosa (RP) las neuronas fotorreceptoras (FR) mueren selectivamente por apoptosis causando la pérdida progresiva e irreversible de la visión. Una estrategia prometedora para lograr un tratamiento más efectivo o eventualmente la cura de la RP es la de regenerar los FR eliminados utilizando células gliales de Müller (CGM), consideradas células madre. Sin embargo, en mamíferos, las CGM no regeneran los FR ni en la RP ni en su modelo animal, los ratones ?rd1?, portadores de una degeneración similar a la RP. Las causas de esta incapacidad; el rol de las CGM y sus posibles alteraciones en estas patologías están aún inexplorados. Recientemente utilizando cultivos mixtos neuro-gliales demostramos que las CGM rd1 presentan disminuida expresión de marcadores de multipotencialidad y menor progresión del ciclo celular (Volonté y col., 2019). Asimismo, demostramos que las CGM en dichos cultivos presentan notables alteraciones en su morfología respecto de su contraparte wt, como marcada retracción en su citoesqueleto de actina y una pérdida casi completa de sus lamellipodios, conduciendo a una disminución en el tamaño del cuerpo celular y a una morfología distorsionada (Volonté y col., 2019). Asimismo, demostramos que en dichos cultivos se encuentra un excesivo número de neuronas interactuando con las CGM respecto de los wt (Volonté y col., 2019). Nuestra hipótesis es que las CGM rd1 tienen alterada la síntesis y/o secreción de proteínas de matriz extracelular, lo cual interferiría en su adhesión y extensión de lamelipodios. Por ello el objetivo de este trabajo fue estudiar si el pretratamiento de los cultivos mixtos neurogliales rd1 con matriz extracelular restauraría la morfología de las CGM rd1 e investigar si la expresión de la proteína de matriz extracelular SPARC/osteonectina estaría alterada en las CGM rd1.Métodos: Se utilizaron cultivos mixtos neuro-gliales obtenidos de retinas de ratones wt y rd1 de 2 días postnatal (PN). Los cultivos mixtos obtenidos de retinas rd1 fueron sembrados en cápsulas previamente tratadas o no con medio condicionado de la línea Schwannoma (RN22). Estos cultivos fueron seguidos en el tiempo cada 24 hs obteniéndose microfotografías de contraste de fase y fijados a distintos tiempos. Estos cultivos fueron marcados con faloidina y con la sonda nuclear DAPI. Se analizó la morfología de los acúmulos neuro-gliales (cerrados, intermedios y abiertos), la superficie de los acúmulos abiertos, la relación del número de neuronas totales respecto del número de CGM totales por cápsula, y el número de filopodios, lamelipodios y contactos neura-neurona. Por otra parte, se estudió la expresión de SPARC/Osteonectina mediante inmunocitoquímica en cultivos mixtos neuro-gliales wt y rd1 a día 6 y 11. Resultados: El pretratamiento de las cápsulas con Schwannoma favoreció la extensión de las CGM rd1 semejando a la morfología de las mismas en los cultivos wt. Asimismo, dicho pre-tratamiento promovió la extensión de las CGM rd1 a partir del día 2 in vitro e incrementó significativamente la superficie promedio de los acúmulos abiertos al día 4. Además, observamos que el pre-tratamiento con Shwannoma disminuyó la relación Neuronas totales (Neu-T) sobre CGM totales (CGM-T) e incrementó el número de filopodios, lamelipodios y contactos neurona-neurona a día 6 y 11 in vitro. Por otra parte, la expresión de la proteína de matriz extracelular SPARC/Osteonectina en las CGM estaba significativamente disminuida en los cultivos mixtos neuro-gliales rd1 a día 6 in vitro respecto de su contraparte wt. Conclusión: Estos resultados muestran que el pre-tratamiento con proteínas de matriz extracelular favorece la extensión y la adquisición de una morfología de las CGM rd1 semejante a las CGM wt y que existen alteración en la expresión de Sparc/Osteonectina en las CGM rd1. Estos resultados sugieren que las CGM presentan alteraciones en la síntesis y/o secreción de proteínas de matriz extracelular durante la degeneración de la retina en ratones rd1.