Modulación diferencial de la infección por virus herpes simplex tipo 1 (HSV-1) en células de Epitelio Pigmentario de la Retina por distintos agonistas de los Receptores X Retinoideos (RXR)

AYALA PEÑA, V.B.; GERMAN, O.L.; SCOLARO, L.A.; ARMIENTO, N.

Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Virología; 2017

Asociación Argentina de Microbiología - Sociedad Argentina de Virología

Diversos factores generan daño en las células del Epitelio Pigmentado de la Retina (EPR), causando patologías, como la degeneración de la mácula relacionada a la edad (DMRE). La infección producida por HSV-1, genera patologías agudas y recurrencias, y se la ha propuesto como un posible factor de riesgo en la progresión de la DMRE. Demostramos que la activación de los RXR, principalmente en su forma heterodimerizada, protege a las células del EPR de la apoptosis inducida por estrés oxidativo e inhiben la translocación nuclear de p65NFkB. Dado que la isoforma RXRα ha sido asociada a procesos de inhibición de la respuesta antiviral celular, y que su localización nuclear está relacionada a procesos anti-inflamatorios y de prevención de muerte, nos propusimos estudiar el rol de los RXR durante la infección con HSV-1 en células de EPR. Para ello, células de EPR humano (D407) se infectaron con HSV-1 (MOI=5UFP/cel). Se las suplementó con el agonista de los RXR:RXR (LG100268), con el agonista de los heterodímeros y antagonista de los RXR:RXR (LG100754) o vehículo. Se analizó la infectividad producida (título y efecto citopático, ECP) y la actividad de interferón (IFN) por un ensayo de reducción del número de placas del virus de la estomatitis vesicular; la expresión de proteínas de la vía NFκB, PARP-1 y RXRα por inmunocitoquímica y WB; los niveles de ARNm de RXRα, BAX, PPARγ y el factor de crecimiento transformante (TGF)β mediante qRT-PCR. En este trabajo mostramos que la infección por HSV-1 generó un ECP característico y que el tratamiento con LG100268 lo redujo, como así también el título viral, lo cual no fue observable en aquellos tratados con LG100754. La infección viral incrementó la activación de la vía NFkB, y disminuyó los niveles de ARNm de TGFβ y del receptor PPARγ, involucrados en las respuestas antiinflamatorias, pero no alteró la actividad de IFN respeto de las condiciones sin infectar. Además, la infección incrementó la síntesis y expresión de RXRα, observándose una localización citoplasmática de este receptor. En las condiciones infectadas, ambos agonistas incrementaron el ARNm de BAX, disminuyeron la activación de la vía NFκB y la actividad de interferón, y no lograron revertir la inhibición de la síntesis del ARNm de TGFβ inducida por la infección. Además LG100268 incrementó los niveles de PARP-1 total y clivado, del ARNm de PPARγ, y disminuyó la expresión de RXRα, a diferencia del incremento pronunciado que indujo LG100754.Nuestros resultados indican que la infección de las células de EPR por HSV-1 favorece un estado pro-inflamatorio, y que a los tiempos estudiados, el tratamiento con los agonistas modulan el nivel de expresión de los RXR, inhiben la actividad basal de IFN e inhiben la activación de la vía NFkB inducida por el virus, sugiriendo que la disminución del ECP y título viral inducida por LG100268 podría deberse a un efecto virucida directo o que el agonista propicie un estado más vulnerable a la muerte en células infectadas.