Vías de señalización involucradas en la respuesta del epitelio pigmentario a altas concentraciones de glucosa. Implicancias en la retinopatía diabética.

TENCONI, P.E.; MATEOS, M.V.; SALVADOR, G.A.; GIUSTO, N.M.

Congreso; XI Congreso AIVO; 2016

Asociación de Investigación en Visión y Oftalmología (AIVO)

OBJETIVOS: el objetivo del presente trabajo es caracterizar nuevos mecanismos moleculares involucrados en la respuesta de las células del epitelio pigmentario de la retina (EPR) sometidas a un modelo de retinopatía diabética (RD) in vitro. En particular estudiamos el rol de la vía de la fosfolipasa D (PLD) en las células del EPR expuestas a altas concentraciones de glucosa.METODOS: como modelo experimental se utilizaron células de EPR humanas (ARPE-19 y D407) incubadas en presencia de glucosa 5,5 mM (situación control, normoglucemia o NG) o de glucosa 16,5 y 33 mM (condiciones de alta glucosa o HG) por 4 y 72 h. La viabilidad celular se evaluó midiendo la funcionalidad mitocondrial por el ensayo de reducción de MTT. Se realizaron ensayos de western blot (WB), de inmunocitoquímica y la actividad PLD se evaluó midiendo la generación de fosfatidiletanol radiomarcado en células premarcadas con ácido oleico tritiado. Se utilizaron inhibidores farmacológicos selectivos de PLD1 (EVJ 0,15 µM), de PLD2 (APV 0,5 µM), de la vía MEK/ERK (U0126 10 μM) y de la cicooxigenasa-2 (COX-2, Celecoxib 10 μM).RESULTADOS: luego de 72 h de exposición a ambas concentraciones de HG la viabilidad celular se redujo un 30% y la generación de especies reactivas de oxígeno se incrementó un 500% con respecto a la condición de NG, lo que se correlacionó con una reducción en la expresión de la enzima peroxirredoxina. Por otra parte, la exposición a HG por 4 h indujo la activación de ERK y la translocación al núcleo de la subunidad p65 del factor de transcripción NFκB. Además, en las células expuestas a HG por 4 h la actividad PLD se incrementó en un 80% con respecto al control. La inhibición farmacológica de PLD1 y PLD2 inhibió la activación de ERK y la localización nuclear de NFκB. Asimismo, la inhibición de PLD1, PLD2, ERK y COX-2 contrarrestó parcialmente la pérdida de viabilidad celular inducida por HG. CONCLUSIONES: nuestros resultados demuestran que la activación secuencial de PLD1 y PLD2, y sus efectores corriente abajo ERK y NFκB median el daño inducido por HG en las células del EPR. Estos hallazgos postulan a estas vías de señalización como potenciales blancos terapéuticos para el tratamiento de enfermedades inflamatorias de la retina, tales como la RD.SUBSIDIOS: PICTS2014-3352 y 2013-2317 (ANPCyT). Subsidio para Investigación en Ciencias Biomédicas, Fundación Florencio Fiorini 2016. PGI 24/B226 8388 (DBByF, UNS).