OPTIMIZACIÓN DE LA PRODUCCIÓN DE LA PROTEÍNA ALFA-SINUCLEÍNA HUMANA RECOMBINANTE EN ESCHERICHIA COLI PARA INVESTIGACIÓN EN ENFERMEDAD DE PARKINSON

GUZMÁN, L; GONZALEZ LIZARRAGA, F; ÁVILA, C

Congreso; Jornadas científicas y encuentro de jóvenes investigadores "Augusto E. Palavecino"; 2020

Introducción: La enfermedad de Parkinson (EP) es un trastorno neurodegenerativo y progresivo que afecta a millones de personas en el mundo. Histopatológicamente se caracteriza por la pérdida de neuronas dopaminérgicas en la substancia nigra pars compacta (SNPC) y por la aparición de agregados proteicos debido a la acumulación de una proteína mal plegada, llamada α-sinucleína (α-syn). La evidencia actual sugiere que estos agregados juegan un papel importante en el proceso neurodegenerativo, afectando muchas funciones subcelulares. Esto motivó el desarrollo de distintas metodologías para la obtención de α-syn que permitan su uso en la búsqueda de estrategias terapéuticas y diagnósticas. En la actualidad, existen numerosos protocolos de expresión y purificación de la proteína en forma recombinante pero con un rendimiento limitado.Objetivo: Incrementar el rendimiento de obtención de la proteína recombinante humana α-syn expresada en E. coli, bajo un sistema de control de expresión T7/lac.Materiales y métodos: En una primera etapa se optimizaron los tiempos de inducción y las concentraciones óptimas del inductor IPTG. En una segunda etapa se ensayó la utilización de medios enriquecidos autoinducibles para la expresión de α-syn.Resultados: La primera etapa permitió alcanzar una mayor producción de la proteína de interés respecto del protocolo tradicional. En cuanto a la última alternativa, que se encuentra aún en etapa de optimización, se muestra prometedora para lograr un mayor rendimiento a escala de laboratorio. Conclusión: Los medios enriquecidos autoinducibles serían una opción viable para implementar en nuestro laboratorio, logrando una mayor expresión de la proteína y disminuyendo los tiempos de intervención del operario.