Expresión del ARNm de ADN metiltransferasas en embriones bovinos cultivados in vitro en presencia de fluido oviductal

BARRERA, DANIEL; JIMENEZ-DÍAZ, MARIA; GARCÍA, E. VANESA; RIZO, GABRIELA; PALMA, GUSTAVO A.; SINOWATZ, FRED; MICELI, DORA C.

Tafí del Valle-Tucumán

Jornada; XXVII Jornadas Científicas de la Asociación de Biología de Tucumán; 2010

Asociación de Biología de Tucumán

En mamíferos, el microambiente oviductal influye sobre factores involucrados en el desarrollo preimplantacional del embrión. Durante el mismo se requiere de la expresión coordinada de genes, antes y después de la transición materno-embrionaria (estadio 8-16 células). En dichos períodos la expresión génica es regulada por modificaciones epigenéticas, siendo una de las más importantes la metilación de citosinas del ADN producida por enzimas denominadas ADN metiltransferasas (DNMTs). Estas variaciones se pueden heredar, sin embargo algunas son reversibles y pueden ser afectadas por estímulos ambientales. Por lo tanto las condiciones del medio ambiente de cultivo a las que se expone el embrión pueden influenciar y/o alterar la expresión de genes que regulan su desarrollo. El conocimiento del efecto del fluido oviductal (FO) sobre el embrión permitiría la formulación de medios de cultivo optimizados para un favorable desarrollo preimplantacional in vitro. El objetivo del presente trabajo fue analizar la expresión de genes DNMT1; DNMT3a y DNMT3b en el embrión bovino cultivado in vitro en presencia de FO, previo a la transición materno-embrionaria. Los ovarios y oviductos, en estadios de metaestro y diestro temprano, fueron obtenidos durante la faena en frigoríficos. El FO fue colectado por aspiración de los oviductos bovinos. Los complejos cúmulo-ovocito (COCs) fueron aspirados de folículos ováricos y luego madurados y fecundados in vitro en condiciones estándares. Los presuntos cigotos fueron cultivados en TCM-199 + BSA (6 mg/ml) y TCM-199 + FO (6 mg/ml) a 38,5°C en atmósfera húmeda con 5% CO2. Del ARN total, aislado de grupos de 20 embriones de 4 células, se realizó la síntesis de ADNc mediante transcripción reversa. El análisis por PCR cuantitativa en tiempo real determinó que la expresión de los genes DNMT1, DNMT3a y DNMT3b se ve incrementada en los embriones cultivados en TCM-199 + FO en comparación con la de embriones cultivados en TCM-199 + BSA. El incremento en la expresión de dichos genes podría estar relacionado con el requerimiento de estas enzimas durante el desarrollo embrionario para que la reprogramación epigenética se lleve a cabo con precisión.