Estudio molecular y de interacción con espermatozoides de una glicoproteína oviductal en Rhinella arenarum

TOMÁS MELANIE; FERNÁNDEZ SILVIA N; VALDECANTOS PABLO; CRESPO CLAUDIA A; ARCE MARÍA BELÉN

Tafí del Valle

Jornada; XXXIV Jornadas Científicas de la Asociación de Biología de Tucumán; 2018

Asociación de Biología de Tucumán

El oviducto de R. arenarum secreta una gran variedad de moléculas que se organizan formando las cubiertas de gelatina que rodean los ovocitos a medida que transitan por el ducto. Una vez liberados los gametos al medio de fecundación, algunas de estas moléculas difunden desde la gelatina constituyendo el factor difusible (FD) y toman contacto con los espermatozoides. Se determinó que una de estas es la glicoproteína de 74KDa (gp74) que induce la reacción acrosómica (RA) durante la fecundación. Si bien se demostró su rol biológico, al presente no se conoce la identidad molecular y si alguna secuencia peptídica de su estructura se conserva evolutivamente. Los objetivos son: a- demostrar la interacción de gp74 con espermatozoides homólogos por marcación de la gp por biotinilización con EZ-Link Sulfo-NHS-LC-biotin y b- determinar y analizar la identidad de esta molécula por huella peptídica. Los resultados demuestran que gp74 aislada y purificada a partir del FD revela fluorescencia sobre la cabeza de los espermatozoides, mostrando una clara marcación e interacción sobre los mismos. Se obtuvo por nano HPLC y espectrometría de masa una secuencia peptídica de 34 aminoácidos a partir de la banda proteica de 74 KDa. Utilizando los programas Proteome Discoverer y BLAST se comparó la misma con secuencias peptídicas en bases de datos del NCBI. Los resultados revelan homología a glicoproteínas de unión a espermatozoides de ZP4 de Rattus norvegicus y Xenopus laevis. En efecto, se obtuvo un alto y mayor grado de significancia en ratón sugiriendo que la secuencia analizada se conservaría evolutivamente. Actualmente continuamos con el estudio genómico y funcional de esta glicoproteína.