PLATAFORMA PARA LA PRESENTACIÓN HETERÓLOGA DE PROTEÍNAS EN LA SUPERFICIE DE BACTERIAS GRAM POSITIVAS PARA SU APLICACIÓN EN VACUNAS DE MUCOSA

VILLENA J; RAYA TONETTI FERNANDA; PADILLA FRANZOTTI CARLA; MULLER M; ARCE L; VIZOSO-PINTO MG

Workshop; workshop en la planta de producción de Sinergium Biotech (Garin. Buenos Aires); 2017

A patir de la base de datos Pfam (PF01476) seleccionamos proteínas con 1 a 5 dominios LysM en Lactobacillusde distintas especies. Se clonará una selección de proteínas con dichos dominios en pDONR207 usando latecnología de clonado recombinatorio Gateway y se subclonará en vectores de expresión que etiqueten lasmismas con N-His-Venus (histidina y la proteína amarilla fluorescente Venus). Evaluaremos la capacidad de losdominios clonados de pegar a Venus a las BLP producidas a partir de distintas cepas de Lactobacillus (L.fermentum, L. vaginalis, L. plantarum, L. rhamnosus) y seleccionar el dominio LysM con mayor capacidad deunión y la cepa de acuerdo a las características inmunobióticas de la misma. Una vez seleccionado, se diseñaráy clonará un plásmidos de destino pDEST (compatibles con Gateway) para etiquetar la(s) proteína(s) de interéscon el motivo LysM seleccionado. De esta forma se generará una plataforma versátil que permita acoplarcualquier antígeno deseado a las BLP. En nuestro laboratorio contamos con una librería de entrada en pDONRpara distintos virus (VZV, HCMV, HEV) y para probar el principio seleccionamos la proteína de cápside de HEV(ORF2)22, el principal antígeno. Se subclonará y acoplará la proteína ORF2 entera y trunca N-LysM-HEVORF2a BLP generadas a partir de Lactobacillus de calidad alimentaria. En modelos experimentales de ratón seevaluará la capacidad de las BLP-HEVORF2 administradas por viral oral y/o nasal de potenciar la respuestainmune humoral y celular tanto a nivel sistémico como de mucosas. Se abordará el estudio en célulasinvolucradas en la respuesta inmune innata (dendríticas y macrófagos). Además, se estudiarán in vitro lascélulas de la respuesta adaptativa mediante ensayos de proliferación y producción de citoquinas en cultivos exvivo.