Ultracitoquímica de Ca2+ y Ca2+?ATPasa activa en testículo de anfibio

IRUZUBIETA VILLAGRA AL; MEDINA MF; RAMOS I ; FERNÁNDEZ SN

San Miguel de Tucumán

Jornada; XXXI Jornadas Científicas de la Asociación de Biología de Tucumán; 2014

Asociación de Biología de Tucumán

El objetivo del presente trabajo es evaluar la presencia y localización subcelular de Ca2+ y Ca2+-ATPasa activa en el testículo del anfibio Leptodactylus chaquensis. Se utilizaron ejemplares machos adultos obtenidos en el periodo reproductor (noviembre-febrero). Para la localización subcelular de Ca2+, muestras de testículo se fijaron en solución de piroantimoniato de potasio al 2% y tetróxido de osmio al 1% pH 7,8. Luego fueron lavadas, deshidratadas en una serie de alcoholes y acetona 100% e incluidas en resina epoxi. Para la localización de Ca2+-ATPasa activa, las muestras se fijaron en glutaraldehído 1% - paraformaldehído 1% en tampón cacodilato 0,1 M pH 7,4. Posteriormente las secciones fueron incubadas en presencia de EGTA 10 mM, lavadas en tampón cacodilato sin EGTA e incubadas en un medio conteniendo tampón glicina-KOH 250 mM (pH 9,0), ATP 3mM, CaCl2 10 mM como activador, citrato de plomo 2 mM y L-tetramisol 2,5 mM como inhibidor de fosfatasa alcalina. Las muestras fueron postfijadas con tetróxido de osmio al 1%, deshidratadas en una serie de alcoholes y acetona 100% e incluidas en resina epoxi. Las observaciones se realizaron con microscopio electrónico de transmisión Zeiss 109. Nuestros resultados evidenciaron la presencia de Ca2+ en células de la línea germinativa y células somáticas (de Sertoli). En los espermatozoides se demostró la presencia de depósitos del catión en la cabeza (acrosoma y espacio subacrosomal) y cola (axonema del flagelo). Se reveló actividad del transportador en las membranas plasmática, acrosomal externa e interna y en las membranas de las mitocondrias que forman el collar en la región caudal de la cabeza. En las células de Sertoli, los depósitos del catión se observaron en el núcleo, en el citoplasma, en las mitocondrias y en los cuerpos lamelares y se detectó actividad de la Ca2+?ATPasa en la membrana plasmática de estas células. Estos resultados sugieren que en el espermatozoide, el transportador de Ca2+, localizado en la cabeza, secuestraría al catión para evitar la reacción acrosómica prematura, mientras que la presencia de Ca2+ en el axonema estaría relacionada con el movimiento flagelar. En las células somáticas, las mitocondrias y los cuerpos lamelares serían depósitos del catión.