EVALUACIÓN DE DIFERENTES TÉCNICAS MICROSCÓPICAS PARA LA SELECCIÓN DE LEVADURAS OLEAGINOSAS ANTÁRTICAS

ANGELICOLA M.V.; BARROS J.M.; AYBAR M.J.; FIGUEROA L.I.C.; VIÑARTA S.C.

S. M. de Tucumán

Jornada; Jornadas de Jóvenes Investigadores Augusto Palavecino; 2014

Universidad Nacional de Tucumán (UNT)

Ambientes extremos como la Antártida representan una fuente potencial de levaduras oleaginosas. Éstas, acumulan lípidos, principalmente triglicéridos (TAG) en una alta proporción de la biomasa (20-70%, p/p). Los TAG microbianos han adquirido relevancia como fuente de materia prima alternativa a los TAG vegetales usados actualmente en la industria del biodiesel. Si bien, la metodología disponible para seleccionar levaduras oleaginosas es dificultosa, algunas técnicas microscópicas permiten estimaciones rápidas y cualitativas del contenido lipídico. El objetivo de este trabajo fue evaluar y comparar dos técnicas basadas en microscopía óptica (MO) y microscopía de fluorescencia (MF) para la selección de levaduras oleaginosas. Para ello, se trabajó con 40 cepas de levaduras (19 Rhodotorula spp y 21 Cryptococcus spp), aisladas de la Antártida Argentina, e identificadas previamente por biología molecular. Para favorecer la acumulación de lípidos y facilitar la observación microscópica, las levaduras fueron crecidas en medio MI (C en exceso y N limitante) en cultivo líquido (120 h, 250 rpm) y sólido, a 15°C ó 25°C. Como control negativo se utilizó Saccharomyces cerevisiae ATCC 32051 por su bajo contenido lipídico (< 20%). La MO se realizó previa tinción de los aislamientos con Sudan Black B y safranina. Para la MF se trabajó con el colorante fluorescente lipofílico Rojo Nilo. Por MO, el 100% de las cepas (Rhodotorula spp y Cryptococcus spp) presentó un color azul-negruzco intenso, indicándolas como oleaginosas, a diferencia del control (?) que se tiñó de rojo. No se observaron diferencias en intensidad de color de las cepas analizadas, que permitan seleccionarlas. En contraste, mediante MF, se observaron diferencias tanto en número y tamaño de cuerpos lipídicos, como en intensidad y tiempo de persistencia de la emisión de fluorescencia (color amarillo-oro). Por esta técnica, se seleccionó el 41% de las cepas como oleaginosas. En función de los resultados, la MF sería más apropiada para la selección cualitativa de levaduras oleaginosas. La imposibilidad de observar diferencias por MO y la baja sensibilidad de la técnica podría arrojar ?falsos-positivos?.