PURIFICACIÓN DE ENTEROCINA CRL35 EN DOS PASOS CROMATOGRÁFICOS

MASÍAS, EMILSE; ACUÑA, LEONARDO

San Miguel de Tucumán- Tucumán- Argentina

Jornada; V Jornadas de Jóvenes Investigadores UNT - AUGM; 2012

UNT- Asociación Universidades Grupo Montevideo

Enterocina CRL35, un péptido antimicrobiano producido por Enterococcus mundtii. Es activo contra el patógeno Listeria monocytogenes y tiene un futuro promisorio como biopreservante de alimentos y como posible antibiótico de uso clínico. El objetivo de este proyecto fue, expresar enterocina CRL35 en Escherichia coli para asegurar alto rendimiento y un proceso de obtención simplificado. Para ello se subclonó el gen estructural munA en el vector de expresión pET-22b(+) permitiendo la purificación de enterocina a partir de los sobrenadantes de cultivos de siete cepas de E. coli. Se optimizó la producción en medio M9 y se analizaron diferentes estrategias de purificación. Se logró expresar enterocina CRL35 exitosamente en el sobrenadante de E. coli Rosetta pLysS. La producción fue óptima en medio mínimo M9 suplementado con extracto de levadura 0,2%, NaCl 1%, IPTG 1 mM, EDTA 10 mM, tiempo de inducción de 2,5 hs. Finalmente, la purificación se realizó en dos pasos: precipitación con sulfato de amonio y cromatografía hidrofóbica. En este trabajo se obtuvo enterocina CRL35 en alto grado de pureza siguiendo un procedimiento simple, rápido y de bajo costo que permitirá la producción en mayor escala para su aplicación como aditivo biopreservante en alimentos y en estudios clínicos.