Amiloidosis y aterosclerosis severa: rol de la apolipoproteína A-I

GISONNO, R.; GORGOJO, J.P; PRIETO, E. D.; TRICERRI, M. A.; CURTO, L. M.; RAMELLA, N.

La Plata

Jornada; Jornadas de Investigación de la Fac de Cs Médicas, UNLP; 2020

Facultad de Ciencias Médicas, UNLP

Introducción: Las diferentes conformaciones de proteínas pueden estar involucradas en el desarrollo de manifestaciones clínicas asociadas con la amiloidosis humana. Aunque una conformación fibrilar suele ser el signo del daño en los tejidos de los pacientes, no está claro si esta especie es per se la causa o la consecuencia de la enfermedad. La amiloidosis hereditaria debido a variantes puntuales de la apolipoproteína A-I (apoA-I) se caracteriza por la presencia de proteína fibrilar en las lesiones, en la que generalmente predomina un fragmento N-terminal. Por lo tanto, las mutaciones claramente dan como resultado una mayor agregación de proteínas y proteólisis. En este trabajo, caracterizamos el plegado de una variante natural, apoA-I Lys107-0, que induce amiloidosis más aterosclerosis severa.Objetivos: Caracterizar las estructuras fibrilares de la apoA-I Wt y Lys107-0 obtenidas por oxidación controlada con peróxido de hidrógeno, mediante técnicas biofísicas reconocidas. Evaluar sí estas especies conformacionales son capaces de generar una respuesta proinflamatoria en un modelo de neutrófilos humanos.Materiales y métodos: Oxidamos las variantes de estudio bajo concentraciones controladas de peróxido de hidrógeno y analizamos profundamente la estructura obtenida después de 30 días de incubación por fluorescencia, dicroísmo circular y enfoques de microscopía. La activación de neutrófilos se caracterizó por microscopía de fluorescencia confocal.Resultados: Se obtuvo un alto rendimiento de conformación fibrilar estable bien definida en estas condiciones. Para responder si las estructuras fibrilares pueden inducir eventos celulares asociados con el escenario crónico, incubamos variantes de apoA-I (solubles o agregadas) con neutrófilos humanos, y detectamos la inducción de NETosis causada principalmente por el mutante Lys107-0 oxidado en conformaciones fibrilares. Conclusiones: conclímos que una conformación proteica anómala propensa a la agregación puede inducir una respuesta proinflamatoria. La existencia a su vez de un microambiente proinflamatorio, induciendo oxidación o proteólisis podría, retroalimentar positivamente la activación de dicha respuesta. Estos eventos pueden explicar una estrecha asociación entre la amiloidosis debido a apoA-I Lys107-0 y la aterosclerosis severa.