Estudio de la interacción de la toxina alfa hemolisina de E. coli y de su precursor no acilado con eritrocitos

VAZQUEZ ROMINA; MATÉ SABINA; BAKÁS LAURA; MUÑOZ-GARAY CARLOS; HERLAX VANESA

Santiago del Estero

Conferencia; XLIV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2015

Sociedad Argentina de Biofísica

Alfa hemolisina (HlyA) es una toxinaproteica producida por diversas cepas de E.coli. Es sintetizada como prohemolisina (ProHlyA), un precursor inactivo querequiere ser activado en el citosol bacteriano mediante la incorporación de dosácidos grasos a dos residuos de lisina específicos. HlyA actúa sobre una granvariedad de células blanco, entre ellas eritrocitos, en los que produce un desbalanceiónico, induciendo inicialmente un aumento de Ca2+ que finalmente llevaa la lisis. Esta entrada de Ca2+ activaría canales de K+sensibles a Ca2+, favoreciendo la salida de K+ y agua, loque produce la crenación inicial de los eritrocitos. ProHlyA, en cambio, se unea la membrana del eritrocito en igual medida que HlyA pero su asociación no conducea lisis celular. El objetivo de este trabajo fue profundizar el estudiocomparativo de HlyA y ProHlyA en su interacción con eritrocitos. Mediantemicroscopía se evaluaron los cambios morfológicos producidos en eritrocitos deconejo tratados con HlyA y ProHlyA y, mediante microscopía de fluorescencia, seregistró el aumento de Ca2+ en eritrocitos cargados previamente conFluo-4. Luego de la exposición a HlyA, se observó crenación inicial seguida dehinchamiento y lisis celular, proceso acompañado de un aumento bifásico de los nivelesde Ca2+ intracelular. En cambio, en eritrocitos tratados conProHlyA, se observó crenación de las células sin que ocurra ingreso de Ca2+,no observándose cambios morfológicos posteriores ni lisis. Con el fin deanalizar diferencias en el grado de interacción con la membrana que puedanexplicar estos hallazgos, se evaluó la inserción en monocapas de lípidos simulandola hemicapa externa de la membrana del eritrocito, no encontrándose diferenciasentre ambas proteínas. Estos resultados revelan un efecto directo de lainteracción de la toxina con la membrana que conduce a la crenación del eritrocitosin requerir de los ácidos grasos covalentemente unidos ni de la entrada de Ca2+.