Configuración de apolipoproteína A-I en complejos lipoproteicos discoidales

ANGELA CUELLAR ; EDUARDO PRIETO; PAULA CAREGNATO; HORACIO GARDA

Buenos Aires

Congreso; XL Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2011

Sociedad Argentina de Biofísica

Las lipoproteínas discoidales de alta densidad (dHDL) son intermediarios claves en el eflujo lipídico celular mediado por apolipoproteína A-I (apoAI). Las mismas son secretados por el hígado o se originan por la interacción de apoAI con células. Por la dificultad de su aislamiento, la mayoría del conocimiento proviene de estudios con dHDL reconstituidas. El método más usado para ello es la diálisis con detergentes (1), aunque también pueden obtenerse por la reacción espontánea de apoAI con las vesículas fosfolipídicas en la temperatura de transición de fase, un proceso que puede ser similar a la lipidación ?in vivo? de apoAI. as dHDL consisten de una bicapa lipídica discoidal rodeada por dos moléculas anti-paralelas de apoAI con sus hélices perpendiculares a las cadenas hidrocarbonadas de los lípidos. En dHDL obtenidas por diálisis de colato se detectaron dos ordenamientos co-existentes (2): Uno con las hélices 5 en yuxtaposición(LL5/5), y la segunda con la hélice-5 de una molécula de apoAI yuxtapuesta con la hélice 2 de la otra molécula (LL5/2). En el presente trabajo se usaron tres mutantes de cisteína (K107C, K133C y K226C) marcadas extrínsecamente con grupos fluorescentes. En discos preparados con ellas mediante ambos protocolos, se estimaron las distancias intermoleculares entre las posiciones marcadas por homo- y hetero-transferencia de energía usando mediciones de intensidad, anisotropía y tiempo de vida de fluorescencia. Los datos indican la coexistencia de ambas configuraciones en dHDL generado por colato, pero sólo la configuración LL5/2 estaríapresente en dHDL generadas espontáneamente. Como hemos propuesto anteriormente, los pares de hélices centrales 3-4 formarían un ramillete intermolecular que se inserta en membranas que es posible en la configuración LL5/2, pero no en la 5/5.Referencias:1. Matz, C.E. and A. Jonas, J Biol Chem,, Micellar complexes of human apolipoprotein A-I with phosphatidylcholines and cholesterol prepared from cholate-lipid dispersions.. 257(8): p.4535-40 (1982).2. Silva, R.A., et al., Biochemistry, A mass spectrometric determination of the conformation of dimeric apolipoprotein A-I in discoidal high density lipoproteins. 44(24): p. 8600-7 (2005)Agradecimientos: CONICET, ANPCyT y UNLP