Regulacion de la Actividad del Promotor de GPAT2 Murino

GARCIA FABIANI, MARIA BELEN; CATTANEO, ELIZABETH; PELLON MAISON, MAGALI; MONTANARO, MAURO ALDO; GONZALEZ BARO, MARIA DEL ROSARIO

Congreso; V Jornadas de Bioquimica y Biologia Molecular de Lipidos y Lipoproteinas; 2012

Facultad de Farmacia y Bioquimica, UBA

Regulación de la Actividad del Promotor de GPAT2 murino Autores: María Belén García-Fabiani, Elizabeth R. Cattaneo, Magalí Pellon-Maison, Mauro A. Montanaro and María R. Gonzalez-Baró Lugar de trabajo: Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata (INIBIOLP), Facultad de Ciencias Médicas, UNLP. La síntesis de novo de los glicerolípidos comienza con la acilación del glicerol-3 fosfato. Esta reacción es el paso limitante de este proceso y está catalizada por la glicerol-3-fosfato aciltransferasa (GPAT). Se caracterizaron 4 isoformas de esta enzima en mamíferos, GPAT1 a 4, que difieren en su localización subcelular su función y su regulación. GPAT2, como también GPAT1, es una enzima mitocondrial pero, a diferencia de ésta, no está regulada en hígado en modelos murinos por el ayuno y re-ingesta de glúcidos y su distribución tisular es diferente. Los mayores niveles de expresión de GPAT1 corresponden a tejidos asociados a una alta actividad sintética y metabólica de triglicéridos, como el tejido adiposo y el hepático, mientras que GPAT2 se expresa mayoritariamente en células espermáticas testiculares en condiciones fisiológicas (estudiado en rata y ratón) y en algunas células cancerosas humanas. Dadas estas particularidades, se decidió estudiar la regulación de la expresión de GPAT 2 murina. Se clonó una región de 6.7 kb corriente arriba del inicio de la transcripción y a, partir de ésta, se construyeron fragmentos de 3.3 kb de la región distal y de 3.4 kb y 1.3 kb de la región proximal al sitio de inicio de la transcripción. Estos se insertaron en el vector reportero pGL3 Basic Vector para luego transfectar células CHO K1, MCF7 y HEK 293. En todos los casos la máxima actividad se detectó en la construcción proximal de 3.4 kb. También evaluamos el efecto de testosterona, dihidrotestosterona, estradiol y corticosterona sin encontrar cambios en el nivel de expresión del gen reportero, a pesar de ser una enzima expresada en testículo y de poseer secuencias de consenso para los receptores de estas hormonas esteroideas.