Desarrollo de un equipo automatizado basado en Resonancia de Plasmones Superficiales: hacia la biodetección de analitos de bajo peso molecular en muestras de agua

MAURO COCCO; BAPTISTE AUGUIE; NICOLÁS TOGNALLI; MARÍA A. DAZA MILLONE; CECILIA Y. CHAIN; ALEJANDRO RAMIREZ; DAVID ROMANIN; ANDREA CRIVARO; MARÍA E. VELA; ROBERTO SALVAREZZA; MARTÍN RUMBO; GUILLERMO DOCENA; JORGELINA MONTOYA; ALEJANDRO FAINSTEIN

La Plata

Congreso; : 8º Congreso Argentino de Química Analítica; 2015

La toxicidad de herbicidas tales como el glifosato es motivo de la búsqueda de métodos analíticos cuantitativos que sean capaces de detectar concentraciones por debajo de las ppb en la matriz original. En este trabajo se describe el diseño y funcionamiento de un equipo SPR(Resonancia de Plasmones Superficiales) [1] para el análisis en tiempo real. El sistema integra las bombas y válvulas para la inyección de la muestra y regeneración de la plataforma de sensado y un sistema óptico de alineación y automatización. La superficie sensora (sustrato de vidrio con una película delgada de oro) se funcionaliza con monocapas de alcanotioles que permiten su postfuncionalización de acuerdo al analito que se desea detectar. Como sistema modelo de analito de bajo peso molecular (< 1kDa) se empleó el 2,4-dinitrofenol(DNP) para experimentos de calibración con concentraciones conocidas del anticuerpo anti-dinitrofenol(anti-DNP). La curva de sensibilidad y el rango de detección del método dependerán de la concentración de anticuerpo, tiempo de preincubación y cantidad de analito conjugado a la proteína seroalbúmina bovina(BSA) en la superficie derivatizada.El funcionamiento del dispositivo fue probado modificando el sustrato de oro con el portador BSA-DNP que se conjugó a una monocapa de ácido 11-mercaptoundecanoico (MUA) mediante síntesis amida[2]. El portador y los anticuerpos monoclonales se obtuvieron y purificaron adaptando protocolos ya establecidos[3]. Los ensayos de reconocimiento entre BSA-DNP inmovilizado y el anti-DNP en soluciones buffer se realizaron mediante pasaje de diluciones sucesivas del anticuerpo partiendo de una concentración de anti-DNP 0.54 mg/mL (Fig. 1). Estos ensayos mostraron un límite de detección (LOD) de 540 ppb de anti-DNP.Con estos resultados, la plataforma promete ser un sistema innovador para la detección de analitos de bajo peso molecular en soluciones diluidas (ppb) sin necesidad de pretratamiento y con rápidos tiempos de análisis por muestra (20 min).