Control de la adhesión celular mediante películas de polielectrolitos naturales tratadas térmicamente

N.E. MUZZIO; F. J. RODRÍGUEZ NIETO, M.A. PASQUALE, R. C. CABRERA, A.J. ARVIA; O. AZZARONI; S. MOYA

La Plata

Encuentro; V encuentro Argentino de Materia Blanda; 2014

INIFTA

Las superficies modificadas por multicapas de polielectrolitos (MPE) naturales obtenidas por la técnica de capa por capa proporciona una alta versatilidad para manejar las interacciones célula/ substrato y modificar las propiedades celulares. En este trabajo se estudia la adhesión celular en varios sistemas de polielectrolitos naturales y bajo distintos tratamientos luego del ensamblado. Se utilizaron los siguientes polielectrolitos: alginato sódico (Alg), dextran sulfato sódico (Dex), ácido hialurónico (HA), poli-L-lisina (PLL) y chitosan (Chi). Las películas de, (PLL/Alg)7PLL, (PLL/Dex)7PLL y (Chi/HA)7Chi se ensamblaron por el método de capa por capa. Algunas películas fueron usadas inmediatamente después de su ensamblado (control) y otras fueron dejadas 1-3 días a 4ºC, 24ºC y 37ºC, condiciones 1 (heladera), 2 (mesada) y 3(estufa de cultivos), respectivamente. Se utilizó la línea celular A549 (adenocarcinoma alveolar humano), sembrando 5000 células/cm2 sobre vidrio y las distintas películas. Se incubaron en estufa y se fotografiaron los cultivos al primero, segundo y tercer día pos siembra. La proliferación celular se estudió mediante el ensayo colorimétrico de reducción de metil tetrazolio (MTT). Se realizó la inmunofluorescencia de la vinculina, y la tinción del citoesqueleto y el núcleo en forma convencional. La adhesión celular se evaluó mediante el área, la morfología celular y las características de los contactos focales. Las películas utilizadas no presentaron toxicidad, sin embargo la adhesión celular es dependiente de la combinación de polielectrolitos y su tratamiento posterior. Las películas de (PLL/Alg)7PLL dejadas en las condiciones 1 y 2 no presentaron cambios respecto al control, en tanto que las dejadas en la condición 3 muestran un incremento de área promedio de las células de 407 µm2 a 686 µm2 y la aparación de contactos focales bien desarrollados, un comportamiento similar al del vidrio. Para el (PLL/Dex)7PLL se observa el mismo comportamiento, con un incremento en el área de adhesión de 440 µm2 a 800 µm2. Las películas de (Chi/HA)7Chi control mostraron áreas celulares promedio de 928 µm2, levemente superior a las del vidrio (789 µm2), en tanto que aquellas dejadas en la condición 3 tuvieron una disminución del área promedio a 623µm2. Los tratamientos ensayados cambian las propiedades de adhesión celular debido a posibles cambios en las propiedades intrínsecas de las MPEs, rugosidad, grado de hidratación, rigidez y espesor. Los resultados sugieren la posibilidad de desarrollar un método simple para modular la adhesión sin modificar la biocompatibilidad como alternativa a métodos como el entrecruzamiento o el agregado de nanopartículas.