Caracterización de melaninas del hongo fitopatógeno "Pseudocercospora griseola" utilizando FTIR Y EPR.

BÁRCENA A.; ROZAS M.; MIRÍFICO M.; GENNARO A.; BALATTI P.; SAPARRAT M.

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; XIII Congreso Argentino de Microbiología. II Congreso de Microbiología Agrícola y Ambiental.; 2013

Asociación Argentina de Microbiología (AAM)

Pseudocercospora griseola es el agente causal de la mancha angular del poroto (Phaseolus vulgaris). Este hongo evolucionó junto con su hospedante y de la misma manera que el poroto se divide en dos formas intraespecíficas, P. griseola f. griseola (andina) y P. griseola f. mesoamericana (mesoamericana). En estudios previos se determinó que estas formas sintetizan distinta cantidad de melaninas de tipo 1,8-dihidroxinaftaleno. Con el fin de conocer el rol de las melaninas en P. griseola, el objetivo de este trabajo fue caracterizar estos pigmentos empleando técnicas espectroscópicas como la infrarroja con Transformación de Fourier (FTIR) y la de resonancia paramagnética electrónica (EPR). Los pigmentos oscuros de los aislamientos S3b (andino) y T4 (meso-americano) de P. griseola se extrajeron en una solución acuosa alcalina (NaOH 1M) y calor a partir de cultivos en medio extracto de papa-glucosa. Los espectros FTIR (4000 ? 400 cm-1) se midieron en pastillas de KBr (Merck, 2 mg de muestra y 20 mg de KBr) y como blanco se empleó una pastilla de KBr. Se empleó un espectrofotómetro Perkin-Elmer-Instruments modelo Spectrum a 1,00 cm s-1 con 4 cm-1 de resolución (64 barridos) y para el análisis se utilizó el programa EZ-OMNIC. Los espectros EPR de las melaninas se registraron en un espectrómetro  Bruker EMX-Plus. Los espectros FTIR de las melaninas de S3b y T4 fueron similares y presentaron varias bandas características: 3440-3300 cm-1 (estiramiento de enlaces O-H y N-H); 2925 cm-1 (estiramiento de enlaces C-H de grupos metilo y metileno); 1654-1656 cm-1 (dobles enlaces conjugados C=C y C=O en los anillos aromáticos y C=O en aminas secundarias, típicas de estructuras quinoides conjugadas y clave en la identificación de melanina); 1408-1410 cm-1 (vibraciones de grupos C-H adyacentes a grupos COOH y OH, y C=O de quinonas); y 1100-1050 cm-1 (estiramiento de los enlaces C-O en alcoholes alifáticos). El espectro EPR del pigmento de ambos aislamientos registró una señal ( g = 2,006) que indica la presencia de radicales libres estables en su estructura, acorde a su identificación como melanina. La cantidad de radicales libres en el pigmento de T4 fue mayor que en el de S3b. Estas diferencias probablemente están relacionadas con la pigmentación de los representantes de las formas intraespecíficas  y la tolerancia de los aislamientos al estrés.Ver: página 231 del Libro de Resúmenes