Terapia fotodinámica en cultivos de células HeLa con aplicación de radiación proveniente de lámpara LED de 652 nm

M. E. ETCHEVERRY; M. C. GALARZA; M. A. PASQUALE; M. GARAVAGLIA

Taller; VIII Taller de óptica y fotofísica - TOPFOT 2012; 2012

La terapia fotodinámica (TF), si bien se conoce hace más de un siglo, se comenzó a utilizar como un tratamiento efectivo contra ciertos tipos de cánceres desde el advenimiento del láser en 1960. En este trabajo se presentan resultados de TF sobre cultivos de colonias de células tumorales de cáncer de cuello uterino (HeLa), empleando como fuente de radiación una lámpara LED que emite en 650 nm con una potencia de 0.9 W. Se utilizó la temoporfirina FoscanR, Cloruro de (meta-tetra(hidroxifenilo)), que es un fotosensibilizador de segunda generación, con mejoras en las propiedades químicas y fotofísicas. Su uso está aprobado para el tratamiento de pacientes con cánceres avanzados de cabeza y cuello y carcinomas escamosos. Las células HeLa (pasaje 48) se cultivaron en medio RPMI conteniendo 10 por ciento de suero fetal bovino sembrando 7500 células por centímetro cuadrado y manteniendo la temperatura a 37 grados celsius y una atmósfera de 5 por ciento en dióxido de carbono y 97 porciento de humedad. Luego de la siembra los cultivos se incubaron durante 24 hs y se utilizaron para los estudios fotodinámicos. Una vez incorporado el fotosensibilizador, los cultivos fueron manipulados en cajas opacas para evitar el efecto de la luz natural. La concentración de FoscanR (cF) se varió entre 0,05 < cF < 80 microgramo/ml y los tiempos de aplicación de la droga (tF) en el intervalo 90 < tF < 4320 min. La dosis de radiación se aplicó durante 2 < tR < 18 min en forma continua o fraccionada. La viabilidad de las células antes y posterior al tratamiento se evaluó mediante colorantes supravitales convencionales (DAPI + Ioduro de Propidio) y microscopía óptica distinguiendo el tipo de muerte celular producido por el tratamiento. La localización intracelular del fotosensibilizador se estudió mediante microscopía de fluorescencia; el fotosensibilizador se localizó en el aparato de Golgi y el retículo endoplasmático. La concentración en el retículo endoplasmático aumentó con el tiempo de absorción de la droga. El estudio de distintas concentraciones de FoscanR mostró que para cF > 40 microgramos/ml y tF > 24 h, la droga presenta toxicidad natural hacia las células en cultivo, aún en ausencia de radiación. Para las otras concentraciones ensayadas las células permanecen viables mientras no son sometidas a las dosis de radiación. Para cF