Terapia fotodinámica en cultivos de células HeLa con aplicación de temoporfirina y radiación de 652 nm

M. E. ETCHEVERRY; M. C. GALARZA; M. A. PASQUALE; M. GARAVAGLIA

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; XL Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica (SAB 2011); 2011

En este trabajo se presentan resultados de terapia fotodinámica sobre cultivos de colonias de células tumorales de cáncer de cuello uterino (HeLa), empleando como fuente de radiación una lámpara LED que emite en 650 nm con una potencia de 0.9 W. Se utilizó la temoporfirina (Foscan), Cloruro de (meta- tetra(hidroxifenilo)), que es un fotosensibilizador de segunda generación, con mejoras en las propiedades químicas y fotofísicas respecto a drogas anteriores. Su uso está aprobado para el tratamiento de pacientes con cánceres avanzados de cabeza y cuello y carcinomas escamosos. Las células HeLa (pasaje 48) se cultivaron en medio RPMI conteniendo 10% de suero fetal bovino sembrando 7500 células por centímetro cuadrado y manteniendo la temperatura a 37 grados celsius y una atmósfera de 5% en dióxido de carbono y 97% de humedad. Luego de la siembra los cultivos se incubaron durante 24 hs y se utilizaron para los estudios fotodinámicos. Una vez incorporado el fotosensibilizador, los cultivos fueron manipulados en cajas opacas para evitar el efecto de la luz natural. La concentración de Foscan (cF) se varió entre 0,05 y 80 microgramo/ml y los tiempos de aplicación de la droga (tF) en el intervalo comprendido entre 90 y 4320 min. La dosis de radiación se aplicó durante intervalos de tiempo entre 2 y 18 min, en forma continua o fraccionada. Ocasionalmente se realizaron comparaciones con un láser Medligth FD1 de uso clínico que emite en 652 nm. La viabilidad de las células antes y posterior al tratamiento se evaluó mediante colorantes supravitales convencionales y microscopía óptica. La localización intracelular del fotosensibilizador se estudió mediante microscopía de fluorescencia; el fotosensibilizador se localizó en el aparato de Golgi y el retículo endoplasmático. La concentración en el retículo endoplasmático aumentó con el tiempo de absorción de la droga. El estudio de distintas concentraciones de Foscan mostró que para cF entre 40 midrogramo/ml y tF mayores que 24 hs, la droga presenta toxicidad natural hacia las células en cultivo, aún en ausencia de radiación. Para las otras concentraciones ensayadas las células permanecen viables mientras no son sometidas a las dosis de radiación. Para cF menor que 0,05 microgramo/ml, tF = 2880 min y tR = 10 min, ya no se observó efecto sobre las células y el cultivo continuó en proliferación. Para concentraciones de droga superiores a 0,05 microgramo/ml se logra un mayor deterioro con el aumento de tF y tR. Para las concentraciones cF más altas ensayadas los daños celulares se observaron incluso durante la aplicación de la radiación: en las células comenzaron a aparecer vacuolas al tiempo que disminuía su área de adherencia con el substrato. Luego de 24 hs del tratamiento la cantidad de muerte aumentó para todas las concentraciones donde es efectiva la concentración de la droga. Los resultados preliminares de este trabajo indican que la fuente de radiación empleada resulta útil para los estudios fotodinámicos para modelos in vitro, y en el futuro deberá probarse su utilidad para modelos animales in vivo.