Análisis de la variabilidad genómica de Iridovirus de mosquitos (MVI: Mosquito Virus Iridiscente), aislados de poblaciones naturales, mediante la utilización de una biblioteca genómica.

MUTTIS EVANGELINA; PABLO D. GHIRINGHELLI; FERRARI WALTER; GUEVARA SOLEDAD; MICIELI MARIA VICTORIA

La Rioja

Jornada; XI Jornadas Regionales sobre mosquitos; 2018

Universidad Nacional de La Rioja

La familia Iridoviridae comprende virus patógenos de vertebrados y de invertebrados, principalmente insectos pero también crustáceos y moluscos de hábitat acuático o húmedo. Los Iridovirus se caracterizan por su forma icosaédrica y un tamaño aproximado de entre 120 y 300 nm. Otra particularidad de este virus es el efecto óptico que se produce cuando las partículas se encuentran apiladas masivamente a modo de arreglo paracristalino reflejando color iridiscente (King et al., 2012). Los colores pueden variar desde el violeta al turquesa como también desde el verde al naranja (Williams, 2008). Estudios preliminares indican heterogeneidad genética. Poblaciones que comparten lugar y tiempo pueden albergar variantes genéticamente distintas. La cuantificación de la variación intraespecífica en el genoma viral mejoraría nuestra capacidad para definir las especies y representaría un primer paso hacia la comprensión de la relación entre el genotipo y el fenotipo de la infección de estos virus. En el presente trabajo realizamos un estudio de la variación en segmentos del genoma viral de distintos aislamientos virales que presentaron diferentes condiciones, como ser: fenotipo, especie de mosquito, sitio de cría del vector y fecha de colecta. Para ello se llevó a cabo la amplificación de secuencias a partir de cinco pares de oligonucleótidos específicos diseñados a partir de la secuencia de algunos clones correspondientes a una biblioteca genómica obtenida mediante la digestión de una cepa de referencia (aislamiento de La Granja, La Plata) con la endonucleasa HindIII. La extracción de ADN se realizó con el Kit de Purificación de ADN (WizardGenomic DNA, Promega). Las muestras analizadas correspondieron a 28 larvas de Culex pipiens infectadas con el virus recolectadas en zanjas de distintas localidades del partido de La Plata y Berisso y en distintos momentos del año y a dos larvas de Aedes albifasciatus. Los estados inmaduros colectados se revisaron para sintomatología de infección con Iridovirus con microscopio estereoscópico bajo fondo oscuro. La identificación de las larvas de 4to estadio se realizó utilizando claves dicotómicas. Los ejemplares que mostraron iridiscencia fueron conservados a -70ºC hasta su procesamiento. Se utilizaron 3 ejemplares para cada condición evaluada. Se construyó una matriz de presencia / ausencia de las bandas correspondientes a los amplicones generados con los cinco pares de primers para cada muestra procesada y se construyó un dendrograma que agrupa los patrones por grado de similitud. Los resultados muestran que los amplicones correspondientes a los juegos de primers IC28 e IC35 se encuentran mucho más conservados que los otros, los cuales muestran alta variabilidad. La variabilidad observada no pudo ser asociada con ninguno de los factores estudiados. En base a estos resultados se aprecia una heterogeneidad en los aislamientos que, potencialmente se puede interpretar como la detección de una cepa altamente variable.