AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN DE UNA CEPA ENTOMOPATÓGENA DE Photorhabdus luminescens OBTENIDA A PARTIR DE UNA POBLACIÓN NATIVA DE Heterorhabditis bacteriophora (Nematoda)

LEOPOLDO PALMA; FERNANDA ACHINELLY; GRACIELA BENITENDE; WALTER FERRARI; MARIANO BELAICH; DIEGO SAUKA; DAIANA ELICECHE; NANCI LÓPEZ; DANIEL GHIRINGHELLI

Mar del Plata

Congreso; IV Congreso Argentino de Microbiología; 2018

Asociación Argentina de Microbiología

El género Photorhabdus (Enterobacteriaceae) incluye bacterias gram-negativas móviles que mantienen una asociación simbiótica con nematodos parásitos de insectos de la familia Heterorhabditidae. Una vez que el juvenil infectivo del nematodo (JI) invade un insecto, las bacterias son liberadas produciendo toxinas y metabolitos secundarios que pueden matar al hospedador por septicemia dentro de las 48 h. El objetivo de este trabajo fue caracterizar un aislamiento de Photorhabdus spp. asociado a una población nativa de entomonematodos. La bacteria se aisló a partir del nematodo Heterorhabditis bacteriophora cepa SP, obtenido de muestras de suelo colectadas en un establecimiento hortícola de La Plata (Buenos Aires). Larvas del coleóptero Tenebrio molitor se utilizaron como hospedador cebo para la obtención de los nematodos a partir de las muestras de suelo. Los cadáveres de los insectos infectados (48 h post mortem) se esterilizaron por inmersión en etanol 70% y se punzaron con microjeringa por los intersegmentos para obtener la bacteria. Una gota de hemolinfa se sembró en medio NBTA y se mantuvieron a 29oC durante 48 h. La caracterización de la cepa se realizó por secuenciación de su ADN genómico total (Illumina), análisis de espectrofotometría de masas (MALDI-TOF), y pruebas bioquímicas API 20E, API20 NE y API 50CH. La patogenia fue evaluada en larvas de T. molitor por microinyección de bacterias en la hemolinfa. Para el ensamblado de las lecturas crudas de la secuenciación genómica se utilizó el software Geneius R10. Se generaron 334 contigs con un tamaño total de 5.294.507 bp y un porcentaje de G+C de 42,5%. La anotación genómica se llevó a cabo utilizando el servidor RAST obteniéndose 5.165 secuencias codificantes (CDs), de los cuales 25 mostraron homología con genes de toxinas insecticidas ya descritos y que serían los responsables de la actividad insecticida de esta cepa contra T. molitor. Los resultados por MALDI- TOF (2.13) y el análisis de secuencia de los genes de 16s rRNA, gyrB, y glnA indicaron un 99,7 % de similitud con la cepa de referencia TTO1 P. luminescens subsp. laumondii. Sin embargo, presentó diferentes caracteres fenotípicos que nos hace pensar que esta cepa nativa de P. luminescens podría constituir una nueva subespecie. Estudios fenotípicos y genotípicos complementarios podrán o no confirmar esta hipótesis.