EVALUACIÓN DE CULTIVO CELULAR EN DISPOSITIVOS DE MICROFLUÍDICA PARA SU APLICACIÓN EN LA PRODUCCIÓN DE ANTICUERPOS MONOCLONALES

A. PEÑAHERRERA; G. ROSERO; N. BOURGUIGNON; M. PÉREZ; M. SIERRA-RODERO; C. PAYÉS; P. KARP; C. LASORSA; G. HELGUERA; B. LERNER

Córdoba

Congreso; 16º Congreso Internacional de Metalurgia y Materiales SAM-CONAMET 2016.; 2016

Universidad Nacional de Córdoba.

RESUMENLos dispositivos de microfluídica aplicados al cultivo celular permiten crecer células bajo condicionescontroladas apropiadas para la producción de proteínas recombinantes. Con el propósito de dilucidar lascondiciones óptimas para el cultivo de células capaces de expresar proteínas recombinantes en losmicrodispositivos se cultivaron células HEK-293T bajo diferentes condiciones experimentales. Las célulasse cultivaron en dispositivos de polimetilmetacrilato (PMMA) y polidimetilsiloxano (PDMS) en presencia oausencia del agente de adhesión celular poli-D-lisina. Se evaluaron diferentes geometrías y espesores asícomo también la influencia del flujo sobre el crecimiento y adhesión celular [1]. Los resultados muestranque la presencia de poli-D-lisina mejora la adhesión y viabilidad de las células tanto en flujo continuo comodiscontinuo [2]. Adicionalmente, la adhesión óptima de las células fue observada en las esquinas de losmicrocanales, así como también en los canales anchos y las cisternas posiblemente debido a la disminuciónen el estrés hidrodinámico en estas áreas. Los microdispositivos con diseño de cisternas se utilizaron comomodelo para estudiar la distribución de células infectadas con pseudovirus del virus de la estomatitisvesicular (VSV por sus siglas en inglés ?vesicular stomatitis virus?) a través de la expresión de la proteínafluorescente verde (GFP por sus siglas en inglés ?green fluorescent protein?). Estos resultados proveeninformación para la optimización de la arquitectura de los microcanales para cultivos de células adherentesa largo plazo que permitan utilizar los microdispositivos como bioreactores para la producción deanticuerpos monoclonales terapéuticos y la actividad biológica in vitro de fármacos.ABSTRACTMicrofluidic chips are useful devices for cell culture that allow cell growth under highly controlledconditions, as is required for production of therapeutic recombinant proteins. To understand the optimalconditions for growth of cells amenable of recombinant protein expression in these devices, we culturedHEK-293T cells under different microfluidic experimental conditions. The cells were cultured in polymethylmethacrylate (PMMA) and polydimethylsiloxane (PDMS) microdevices, in the absence or presence of thecell adhesion agent poly-D-lysine. Different microchannel geometries and thicknesses, as well as theinfluence of the flow rate have also been tested, showing their great influence in cell adhesion and growth[1]. Results show that the presence of poly-D-lysine improves the adhesion and viability of the cells incontinuous or discontinuous flow [2]. Moreover, the optimal adhesion of cells was observed in the corners ofthe microchannels, as well as in wide channels and oval culture wells possibly due to the decrease in theshear stress in these areas. The microdevices with the oval culture wells design were utilized as models tostudy the distribution of cells infected with vesicular stomatitis virus (VSV). The distribution was evaluatedthrough the expression of green fluorescent protein (GFP). These results provide information to optimize architecture of microchannels for long-term culture of adherent cells in order to use microfludics devices asbioreactors for therapeutic monoclonal antibodies production, and biological activity of drugs in vitro.