EVALUACION DE PARTIDORES NUCLEARES Y KINETOPLASTIDICOS MEDIANTE PCR EN LA DETECCION DE T.cruzi EN MUJERES CHAGASICA CRONICAS Y SUS RECIEN NACIDOS

LEAL, M, ; ZULANTAY, I, ; MARTINEZ, G, ; SCHIJMAN A, ; BISIO, M, ; MUÑOZ, C, ; APT W

Santiago de Chile

Simposio; XIII JORNADAS ANUALES DE PARASITOLOGIA; 2010

SOCIEDAD CHILENA DE PARASITOLOGIA

Importantes avances se han reportado en la detección del parásito Trypanosoma cruzi en sangre de hospederos y deyecciones de vectores infectados a través de la Reacción de Polimerasa en Cadena (PCR), no obstante, la técnica de PCR en Tiempo Real (PCRq) ha permitido obtener mayor y más relevante información de la relación hospedero-parásito. El objetivo de este estudio fue evaluar la aplicación de PCRq en deyecciones de triatominos alimentados mediante xenodiagnóstico (PCRq-XD) para el diagnóstico de la infección por T. cruzi en 21 individuos con enfermedad de Chagas crónica pre y post tratamiento con Nifurtimox. En todos los casos se utilizó ADN extraído (kit Favorgen) de un pool de deyecciones analizadas mediante XD a los 30, 60 y 90 días de incubación de los triatominos. La reacción de PCRq fue llevada a cabo con iniciadores para secuencia satélite (cruzi 1 y 2) y sonda Taqman cruzi 3 en termociclador Rotor-Gene (Corbett, Reino Unido). Para descartar inhibición de la reacción, se comparó el valor umbral del ciclo (Ct) de las muestras en estudio contaminadas con cantidad conocida de ADN de T. cruzi con el Ct obtenido al amplificar esa misma concentración de ADN en ausencia de la muestra. Se trabajó con un rango dinámico entre 1 y 1000 parásitos/ml. Se evaluaron los resultados parasitológicos mediante XD y PCR-XD pre y post terapia en seguimiento promedio de 13 meses y se compararon con PCRq-XD. En condiciones de pre terapia, fueron positivos a XD, PCR-XD y PCRq-XD, 2 (9,5%), 13 (61,9%) y 18 casos (85,7%) respectivamente. En 3 de los casos se obtuvieron resultados de inhibición que fueron resueltos al diluir la muestra 1/10 o ½ según su concentración inicial. En post terapia, no se detectaron casos positivos con XD, mientras que con PCR-XD y PCRq-XD se pesquisaron 3 (14,3%) y 6 casos (28,6%) respectivamente, los que fueron concordantes entre sí, aumentando considerablemente la detección del parásito. En 3 de ellos se determinó una carga parasitaria superior a 1000 parásitos/ml, 2 de estos casos presentaron una inhibición resuelta al diluir la muestra 1/10. En un caso no disminuyó la inhibición a pesar de las diluciones. En todos ellos se verificó la ingesta del medicamento por el período prescrito. La negativización de 14 casos en post terapia nos permite sugerir su utilidad como criterio de respuesta parasitológica en el seguimiento de individuos con enfermedad de Chagas crónica. La técnica de PCRq fue útil para detectar T. cruzi en deyecciones de triatominos alimentados mediante XD y  trabajos de estandarización están siendo desarrollados para su utilización en el seguimiento del tratamiento. En nuestro trabajo, los altos niveles de T. cruzi detectados por PCRq-XD indican falla terapéutica y llevan a estudiar la posibilidad de resistencia de cepas circulantes en individuos post tratados, aspecto de investigación en desarrollo.