Expresión transitoria del gen GUS en embriones somáticos de Amaranthus hypocondriacus L. usando la metodología de transformación mediada por Agrobacterium tumefaciens

RIVERO, M. M.; BISIO, C.; PICCA, P.I.; VILLARREAL, B.; MENTABERRY A.

Rosario, Argentina

Simposio; VII Simposio Nacional de Biotecnología REDBIO-Argentina y II Congreso Internacional REDBIO-Argentina; 2009

<!-- /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman";} @page Section1 {size:612.0pt 792.0pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> Amaranthus hipocondriacus es una planta amarantácea de rápido crecimiento. Constituye un cultivo de gran potencialidad en mercados de alto valor agregado debido al elevado contenido proteico de su grano (15-17% de su peso). Por sus propiedades alimenticias, superiores a las de los demás cereales esta planta es considerada un supercereal. La calidad de sus proteínas está determinada por la ausencia de glúten, el adecuado balance aminoacídico y su elevado contenido en lisina, aminoácido esencial en la alimentación humana. Se germinaron in vitro semillas de Amaranthus hipocondriacus en medio MS (Murashige & Skoog) conteniendo diferentes concentraciones de 2,4-D y BAP adicionado con sacarosa (3%), adenina (80 mg/L) e hidrolizado de caseína (0,5 g/L). Los cotiledones de 4 días post-germinación fueron transformados con la cepa GV3101 de Agrobacterium tumefaciens conteniendo un vector de transformación que incluye el gen reportero GUS y el gen bar de selección que confiere resistencia al herbicida glufosinato de amonio. A partir de los explantos se observó la regeneración directa de agregados embriogénicos sobre la cara adaxial de los cotiledones con la formación de múltiples embriones somáticos en diferentes estadios de desarrollo. En esta etapa se llevó a cabo un análisis histoquímico que reveló la presencia del gen GUS en los agregados celulares. El análisis histológico mostró la integración uniforme del agente revelador X-Gluc en el interior del tejido. La expresión transitoria se evaluó por medio del conteo de puntos azules. Los embriones somáticos se subcultivaron al medio básico MS/2, lográndose la germinación de aquellos en estadio cotiledonar. Se fijó material en diferentes estadios de la respuesta morfogenética y se lo incluyó en parafina. Se llevaron a cabo cortes histológicos seriados para el seguimiento y caracterización de la ontogenia de dichas estructuras. El material vegetal se creció bajo presión de selección en medio MS/2 conteniendo el herbicida glufosinato.