Evaluación de una nueva técnica para tipificar sublinajes TcIId y TcIIe de T cruzi por PCR a partir de muestras biológicas

LORENZ V; DIEZ C; GONZALEZ VDG; BISIO MMC; SCHIJMAN, AG; SOLARI A; MARCIPAR IS

Rosario, Argentina

Congreso; VIII Congreso Argentino de Protozoología y Enfermedades Parasitarias; 2008

Sociedad Argentina de Protozoología (SAP)

En un trabajo previo hemos señalado la presencia de 2 secuencias mayoritarias características del sublinaje TcIId y una del sublinaje TcIIe. Estas secuencias se encuentran al menos 105 veces más representadas en los linajes en los que fueron identificadas que en los demás. Sobre esta base hemos propuesto una técnica de PCR semicuantitativa para identificar cepas de los sublinajes TcIId, TcIIe, o para descartar su presencia. Para esto realizamos una primera amplificación de las regiones hipervariables de los minicírculos (mHVR) del parásito a partir de ADN de la muestra con los primers S121 y S122 y luego sobre 0,3 pg de ADN de este primer producto amplificado, una segunda PCR con los primers específicos para amplificar las 3 secuencias mencionadas. En este trabajo evaluamos la técnica con un panel de 9 muestras ya tipificadas como TcIId por caracterización del miniexón y del ADN ribosomal y de 25 muestras ya tipificadas por hibridización con sondas de mHVR, de las cuales 21son TcIId, 2 son TcIIe y 2 son TcIIe+d. Todas las muestras evaluadas fueron coincidentes con los resultados previos. Luego se realizó la tipificación de 31muestras de pacientes provenientes de Bolivia y distintas regiones de la Argentina mediante esta técnica, los cuales resultaron ser todos portadores de cepas TcIId salvo para un caso que tampoco era TcIIe. Se presentan estos resultados y se discute además la posibilidad de subclasificar, con esta metodología, a las cepas TcIId.