Caracterización de NDPKs en Solanum tuberosum

BACHMANN SD; ULLOA RM

Rosario

Congreso; RAFV 2008; 2008

SAFV

Las plantas desarrollaron diferentes mecanismos defensivos en respuesta a estreses bióticos y abióticos que enfrentan en su ambiente (patógenos, daño mecánico). Esta capacidad de respuesta depende de la activación temprana de genes mediada por diferentes vías transductoras. Las nucleosido difosfato kinasas (NDPKs) están involucradas en varias cascadas de señalización en plantas [1] como ser, respuesta a daño [2], estrés térmico [3], infección por patógenos [4] e intervienen en la cascada de señalización del fitocromo A [5]. La expresión constitutiva de AtNDPK2 en plantas de Arabidopsis confiere mayor tolerancia a múltiples estreses ambientales que involucran acumulación de especies reactivas de oxígeno (ROS)[6]. Las NDPKs son enzimas conservadas que catalizan la transferencia del fosfato γ de nucleósidos trifosfatos (NTPs) a nucleósidos difosfatos (NDPs) a través de un mecanismo ping-pong que involucra un intermediario fosforilado, un residuo histidina conservado en todas las isoformas conocidas. Hay 3 tipos de secuencias de NDPKs en plantas, las de tipo 1 son citosólicas y las otras dos están asociadas a organelas (mitocondria y cloroplastos). Anticuerpos policlonales anti-NDPK humanos detectaron la presencia de un polipeptido de 18 kDa en extractos solubles de hojas de papa que podría corresponder a la isoforma de tipo 1. Se diseñaron oligonucleótidos específicos para amplificar las isoformas de papa basándonos en las secuencias de 3 clones con homología a NDPKs presentes en microarreglos de papa (STMED71, STMHO51, STMHY37). Se realizaron ensayos de PCR usando como templado DNA genómico o cDNA de hojas de papa. Uno de los pares de oligonucleótidos amplificó un fragmento genómico de 1650 nt mientras que el fragmento obtenido a partir de cDNA de hoja fue de 550 nt, indicando la presencia de regiones intrónicas en el gen. La secuencia codificante presentó un 91% de homología con NDPK VI de Spinacia oleracea, localizada en cloroplastos. Se detectó expresión de ésta isoforma en brotes de papa. Este proyecto se financia con subsidios UBACYT, PIP-CONICET y PICT. Bibliografía [1] Dorion et al (2006)J Exp. Bot 57: 4079-4088 [2] Harris et al (1994) Plant Mol. Biol. 25, 739:742. [3] Escobar Galvis et al (2001) Plant Physiol. 126, 69:77. [4]Cho et al (2004) Mol. Cells, 18: 390-395 [5] Choi et al (1999) Nature 401, 610–613. [6] Moon et al (2003) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100, 358−63.