Busqueda de caracterisiticas moleculares unicas en el factor de elongacion 2 de Trypanosoma cruzi

SIMONETTI L; JEREZ B; JURI AYUB M; LONGHI SA

Buenos Aires

Congreso; XXV Reunion Cientifica Anual de la SAP; 2012

MSal y SAP

El Factor de Elongación 2 (EF2) es una proteína que participa en la translocación del ribosoma durante el proceso de síntesis peptídica. Posee un centro GTPasa que se forma por la interacción del EF2 con las proteínas ribosomales P junto a la proteína L12 del ARN ribosomal 28 S. Para comprender como interacciona el EF2 de Trypanosoma cruzi (TcEF2) con las proteínas ribosomales P y estudiar la traducción en tripanosomátidos, se decidió realizar el clonado en un sistema que sufra todas las modificaciones post-traduccionales de los organismos eucariotas. Para ello se utilizó el vector pYes2.1-TOPO el cual permite la expresión inducible por galactosa de proteínas en Saccharomyces cerevisiae. Además, como control, también se clonaron los EF2 de S. cerevisiae (ScEF2) y de Mus musculus (MmEF2). Todos los clonados fueron analizados por RFLP y secuenciación, y su correcta expresión se confirmó mediante Western Blot. A fin de obtener información sobre el grado de similitud funcional entre los EF2, se realizaron ensayos de complementación en S. cerevisiae, utilizando una cepa knock-out condicional para EF2. Esta cepa contiene una copia de ScEF2 en el vector pCBG1202, que se expresa sólo en presencia de galactosa. Para realizar las complementaciones, los EF2 fueron subclonados al vector de expresión constitutiva p416-GPD. La cepa fue transformada con las diferentes construcciones, así como con el vector vacío, y las células se crecieron en medio con glucosa 2%. Resultados preliminares sugieren que TcEF2, así como MmEF2, no complementan el sistema traduccional de levaduras. El conocimiento detallado de las diferencias entre la maquinaria de síntesis proteica de T. cruzi y la de otros eucariotas, especialmente la de mamíferos, podría revelar importantes hallazgos sobre la evolución del mecanismo de traducción y la regulación de la expresión génica en tripanosomátidos. Este conocimiento podría, además, ser utilizado para el diseño racional de drogas anti-parasitarias específicas.